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标题:【求助】怎样冻存细胞

雪花子[使用道具]
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发表于 2015-12-10 11:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】怎样冻存细胞

各位战友，你们好！
我是临床研究生，对一些试验规则不大懂，还希望给予帮助。我分离白细胞后，要做细胞免疫化学法，每次的标本又少，因此就决定把标本冻起来，当时问了几个实验室的技师，他们冻存细胞都是先直接在液氮罐里过夜，次晨投入液氮罐，而液氮上方也就是－80度，因为我细胞只需要保存2～3个月，因此我问实验室技师，能不能直接放到－80度冰箱保存，他们说可以，我也就这么做了，我现在冻存了40个样本，现在很多同学都说这样不行，需要梯度冻存，我越来越担心，请各位同学告诉我，这些细胞复苏后还能活吗？如果这样不行，那么还可以怎样简易冻存细胞？
再顺便问一下，细胞免疫化学法是否一定要活的细胞？
谢谢！
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发表于 2015-12-10 11:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1 能不能直接放到－80度冰箱保存
可以，－80度冰箱保存半年没有问题。我最开始做细胞的时候跟你一样，总觉得没按照书上的标准步骤做不知道细胞能不能活，后来事实证明冻存的细胞直接放到－80度冰箱保存是可以的，复苏后细胞活力很好。
我觉得冻存细胞主要与下面两点有关，第一冻细胞时细胞本身的活力，如果细胞状态好那么细胞复苏后活力也会不错，所以细胞状态好时记得多冻两支。第二 细胞的数量有关，1支冻存管里细胞密度高点好。
2 免疫细胞化学必须要用活细胞来做
你的细胞要放－80度冰箱保存，我有个建议，每个标本放至少一支细胞到液氮罐中保存，因为如果－80度冰箱坏了后果是不堪设想的。
祝你好运！
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发表于 2015-12-10 11:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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记得《细胞培养技术》上有段文字说，细胞在－70冻存1个月，细胞的活力没有什么大的变化，但一个月后细胞活力会急剧下降。
因此我觉得有条件最好冻到液氮，这样保存更好。
对于冻细胞的步骤，梯度降温最好，这样复苏率会高些。
一般我是4度45分钟，－20度半小时，－70过夜，再投到液氮
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发表于 2015-12-10 11:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
“分离白细胞后，要做细胞免疫化学法，”
问题太笼统了，不清楚你要用淋巴细胞做什么？
导致战友们的回答集中在“细胞冻存-复苏”。
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发表于 2015-12-10 11:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

2楼的细胞冻存方法是最常用的,但要看是什么冻存剂,如果是DMSO等渗透型保护剂的话这种方法较好.最好的冻存方法应该是超速冻存,就是将细胞以很快的速度降温.这样的话细胞内外呈玻璃化凝固,无冰晶形成,或形成很小的冰晶,对细胞膜和细胞器损伤很小甚至不造成损伤,细胞也不会因为在高浓度溶质的溶液中暴露时间过长而受损.
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发表于 2015-12-10 11:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

慢冻速融啊，
我们一般是4度40分钟～1小时，－20度两小时，－70度过夜，再放液氮罐，复苏后细胞长得很漂亮Wink
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2015-12-10 11:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们实验室冻存细胞同楼上的差不多。
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2015-12-10 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
－80度完全可以啦，我们实验室的有时嫌冻存麻烦，就放到冰箱里，后来还是可以一样用的，而且你的时间又不长。当然，如果为了小心期间，还是冻存吧！
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yizhi[使用道具]
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发表于 2015-12-10 11:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得－20最好不要超过1小时，许多资料上都这么说
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ALALA[使用道具]
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发表于 2015-12-10 11:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们实验室简易的方法是：将冻存小袋放在液氮罐口约2min,将小袋直接放入液氮即可。忘了哪本书也介绍过此方法，可试试！但冻存剂是1份DMSO，9份培养液
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