细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】HUVEC种类及上海细胞库EA.hy926

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 18  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】HUVEC种类及上海细胞库EA.hy926

ending[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76092
精华 0
积分 771
帖子 1242
信誉分 100
可用分 6981
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
1

发表于 2015-12-11 09:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】HUVEC种类及上海细胞库EA.hy926


需要用人脐静脉内皮细胞做心血管方面的实验，在选择细胞时纠结了好久，原代细胞普遍反映难养，而且只能传几代而已。买细胞株的话有三种，HUVEC-C,HUVEC-CS,EAHY926:HUVEC-C在培养时要添加生长因子，貌似不太好养，不过据北京中原公司讲是卖的最多的ATCC HUVEC类型；HUVEC-CS 不需要加生长因子，但是价格很高，而且在网上查到的用这个细胞的文献很少；EAHY926是永生细胞株，应该是最好养的，价格也还可以，但是是融合细胞株，虽然文献中都说可以很好的代表内皮细胞，反映其特性，用这个细胞的文献也不少，但是还是不确定是否国际公认。今天查到上海细胞所可以买这种细胞，不知道和ATCC的差别大不大。以上是个人对HUVEC的一些分析，欢迎大家讨论
另外请问有没有战友从上海细胞所买过EAHY926，质量如何，或者有没有看到SCI文章用到上海细胞所的HY926细胞，急盼指导
顶部
seagate[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 114508
精华 0
积分 601
帖子 922
信誉分 100
可用分 5343
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
2

发表于 2015-12-11 10:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我在上海所买了一株926，一直都没有养起来！正在郁闷中！
顶部
summerxx[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75852
精华 0
积分 885
帖子 1388
信誉分 101
可用分 7783
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-28
状态 离线
3

发表于 2015-12-11 10:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 seagate 于 2015-12-11 10:01 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我在上海所买了一株926，一直都没有养起来！正在郁闷中！

我也要养这个细胞系，请问现在你养的怎么样了，能分享一下具体的培养方法吗？不胜感激！！！
顶部
okhaha[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77505
精华 0
积分 548
帖子 756
信誉分 100
可用分 4651
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
4

发表于 2015-12-11 10:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼上的能否传授这个细胞系的培养方法啊？
顶部
ending[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76092
精华 0
积分 771
帖子 1242
信誉分 100
可用分 6981
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
5

发表于 2015-12-11 10:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 okhaha 于 2015-12-11 10:11 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

楼上的能否传授这个细胞系的培养方法啊？

就用GIBCO DMEM培养基 加10%胎牛血清，就可以了，一传三
顶部
雪花子[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 72953
精华 1
积分 259
帖子 194
信誉分 102
可用分 1776
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
6

发表于 2015-12-11 10:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问是自己配的培养基吗?GIBCO DMEM液体培养基的碳酸氢钠浓度都有3700mg/l，也没问题吗?
顶部
greenbee[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79370
精华 0
积分 710
帖子 1119
信誉分 100
可用分 6368
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
7

发表于 2015-12-11 10:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
就用GIBCO DMEM培养基 加10%胎牛血清，就可以了，一传三

===================

不用加双抗吗？
顶部
ending[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76092
精华 0
积分 771
帖子 1242
信誉分 100
可用分 6981
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
8

发表于 2015-12-11 10:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

哦 忘记讲了 要加双抗的
顶部
xiaoxiaoniao[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 108878
精华 0
积分 509
帖子 677
信誉分 100
可用分 4049
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
9

发表于 2015-12-11 10:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也要养这个细胞系，请问现在你养的怎么样了，能分享一下具体的培养方法吗？不胜感激！！！

=============================================================================================================

细胞代号 EAhy926
细胞名称 人脐静脉血管内皮细胞株，永生细胞。
形态特征 多角形，梭形，卵圆形
生长特性 贴壁
传代时间 2-3天传一次
传代比例 一传3-5
培养条件 完全型RPMI-1640 或M199+10 % FBS +双抗
37℃ 5% CO2
传代方法 细胞80 % 融合时，倒掉旧液，加D-hanks’溶液3ml( T75瓶加5 ml)洗一洗倒掉，加1ml消化液（T75瓶加3 ml）消化，显微镜下观察待细胞分离成单个圆形后，弃酶液，加培养基吹打混匀，一瓶分成3-5瓶，直径100mm培养皿加培养基10ml，每T25瓶加培养基6 - 8 ml, T75瓶加培养基至20 ml， 37 ℃ 5% CO2孵箱培养。
冻存液 无血清培养基 + 20 %FBS + 5 %DMSO
消化液 0.25 %胰蛋白酶 + 0.03 % EDTA ，用D-hanks’溶液配制。
冻存方法 细胞80% 融合时，倒掉旧液，加D-hanks’溶液3ml( T75瓶加5 ml)洗一洗倒掉，加1ml消化液（T75瓶加3 ml）消化，显微镜下观察待细胞分离成单个圆形后，弃酶液，加培养液5ml吹打，收集消化细胞于离心管中，800 - 1000 rpm离心5 min。弃上清，加入冻存液，调整细胞密度为5 ×106 ~ 1 ×107 个/ml（直径100 mm培养皿细胞可冻存1 - 2管）。每个冻存管中加入细胞悬液1~1.3 ml，旋紧瓶盖，用封口膜封严，标明细胞的名称，冻存时间与冻存人名。将冻存管插入厚度2寸的泡沫塑料中，- 80 ℃ 2 4h →液氮。
计数方法 取10μl EC悬液于计数板上，计数4角大格每个大格分16个小格细胞，计算公式：4角大格EC数× 104
4
复苏方法 取出细胞冻存管立即放入40 ℃水中，不断摇动使冻存的细胞悬液尽快融化，用75 %酒精纱布擦拭冻存管，放入超净工作台中。方法一：开封后，将细胞悬液用吸管移入装有9ml hanks’溶液的离心管中，静置3 - 5 min，1000 rpm离心3 - 5 min，弃上清，加10倍体积的培养液吹打混匀，将细胞接种在培养皿/瓶中。方法二：不离心，将细胞冻存液用吸管移入装有10 ml培养液的培养皿，继续培养，4 – 24h后更换培养液去除DMSO。24 h后取出培养瓶，观察细胞生长状况。
顶部
seagate[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 114508
精华 0
积分 601
帖子 922
信誉分 100
可用分 5343
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
10

发表于 2015-12-11 10:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我现在就养这个细胞，比原代细胞好养，要求不是很高，用DMEM+10%胎牛血清，传代就用普通的方法，一般是一传二，因为这个细胞对密度要求相对较高，密度小的话，会影响细胞的形态和性能。
目前，我的培养基中没有加双抗，感觉没什么问题。另外根据个人实验经验，发觉培养基多加一些，细胞长的会更好（呵呵，偶然发现的）。
顶部
 18  1/2 12››