【分享帖】成功处理白色念珠菌污染的经验

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标题:【分享帖】成功处理白色念珠菌污染的经验

fklo83[使用道具]
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发表于 2015-12-11 10:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

前几天，去了上海，杭州晃了一圈，得到同学的热情招待，这两天之所以没有更新空间，是因为回来之后细胞被污染，忙的不可开交，想尽了一切办法来去除污染，哎，那叫一个烦啊，再说，在这个举国悲痛的时刻，咱也要为灾区的同胞们默哀，之后，在不久的将来，我会更新这次沪杭之行，先介绍介绍这次自己去除污染的经验，很宝贵哦……
首先，回来之后，观察细胞状态很好，细胞形态很好，数目也很多，本人按照无菌的操作，先酒精擦拭瓶子，再消毒水擦，而且怕出问题，我现配了一瓶培养基，哎，也许就是这步的问题，将拿回来的6种细胞和自己的2种传代之后，第二天就发现瓶子里面出现了很多悬浮的白色透亮的，和细胞差不多大的物体，而且有的还是抱团生长，数目很多，生长速度也很快，很象是漂浮的死细胞，立刻就引起了我的注意，根据经验，这绝对有问题，哎，不出所料，一查，绝对是白色念珠菌污染，园子里面也有这样的类似经历，有一位网友发的图片被大家诊断为白色念珠菌污染，我的和他的情况一摸一样，图片在附件中附加。网上对这种污染办法不多，也没有谁介绍过成功的经验，让我很紧张，如果细胞全部丢掉，那是好几千块钱啊，老板不会放过我的，哎，我只好死马当活马医，按照自己的办法处理了，第二天去一看，80－90％的白色念珠菌都已经皱缩，死亡，那我这几天的阴霾的心情立刻一扫而光，这么多天来好不容易可以睡的着觉了，下面我把具体的步骤写清楚，供大家参考：
第一：将所有的实验器械，包括操作台重新消毒，将培养箱高温消毒（我的培养箱自带180度消毒功能），尤其是枪、枪头和操作台，一定要认真消毒，
第二：将所有的实验用培养基和血清丢弃，这很有可能是最大的污染源，因为自己实在是找不出是哪一步出问题了，只能从头来做了，这估计是我细胞污染的原因，据我分析，之所以全部的瓶子，20瓶都污染，最有可能是培养液污染。
第三：将细胞全部封口，然后配新的培养基，这里最重要，大家注意了啊，在网上我看到有用两性霉素B去除白色念珠菌污染的，但是大都没有什么成功的经验，大部分主张用2微克每毫升的终浓度，也有主张用10微克每毫升的，我本准备从医院购买，但是医院没有，那是相当的郁闷啊，只好找试剂商，25mg，80米啊，也不确定有没有用，但是只好这样，刚买的细胞，要是死了没法向老板交待啊，哎！最后，买到了两性霉素B，我选择了使用5微克每毫升，本来是准备如果没用，那我再加大药量的，我将培养基配好，将所有的瓶子灌满培养基，然后封口，放在外面（因为我的培养箱消毒需要一晚上），晚上回来提心吊胆啊，担心！
第四：在灌培养基之前，要用pbs多次冲洗细胞，尽量洗去大部分的白色念珠菌，我一般是洗3－5次。
经过这一系列的处理，第二天早上怀着忐忑的心情去看我的细胞，发现那些嚣张的白色念珠菌大半都蔫了，一个个没有了往日的风采，全部皱缩，还有很少部分的没有死，但是也没有繁殖，而且我的细胞状态没有收到影响，形态很好，数量也很多，顿时，我的心情是相当的好啊，马上消毒操作台，给细胞换液体，pbs洗涤3次，换上含两性霉素的培养基，每天换液，连续观察7天，换液之后观察，基本上已经没有了白色念珠菌，逐步趋于正常，连续观察，最终获得成功，为此，晚上特地庆祝了一下，喝了两瓶小酒，呵呵，至此，基本上养细胞能碰到的污染我基本上都见过了，哎，什么叫久病成医，现在是再也不怕污染了，兵来将挡，菌来我灭，^_^

附件

2015-12-11 10:49

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xuuuu[使用道具]
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发表于 2015-12-11 10:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

两性霉素好像对细胞本身也有毒性的，这样是否妥当不好说。抗真菌的药最好不要再实验中使用。

c86v[使用道具]
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发表于 2015-12-11 10:50 资料个人空间短消息加为好友

小中大

同意楼上的，而且怕就怕在撤药后菌又长起来。本人的细胞也染了霉菌，也想用两性，又不知对后续实验有没影响，郁闷。。。

sunbent[使用道具]
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发表于 2015-12-11 10:50 资料个人空间短消息加为好友

小中大

Do not try to remove the bacteria, you will never now what is going to hurt your cells. Through them away and get new cells.

ending[使用道具]
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发表于 2015-12-11 10:51 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我很同意楼上的见解，现在我观察了很长时间，发现抗真菌药虽然可以杀死真菌，但是通过这么长时间的观察，我发现我的细胞状态的确没之前好，现在的细胞第一就是生长速度变慢了，而且在几种细胞里面出现了不少细胞胞质内空泡增多，颗粒也增多，细胞形态没有之前那么漂亮，反正，现在总结出一点，就是要堵住源头，我已经将所有的实验器材全部重新消毒，实验室重新灭菌，培养箱重新灭菌，哎，再不希望出现这种情况，细胞状态不是那么好只能再养一段时间，换上不含两性霉素的培养液，多传两代，勤换液，一般每天换液或者是每天换两次液，细胞稍微好一点，状态恢复一些，再多养一段时间吧，争取状态再好一点再做实验，希望大家能够引以为戒！！

guagua[使用道具]
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发表于 2015-12-11 10:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我发现我的也出现了，是源头出现的，现在只好隔天洗几次，郁闷呀，请问楼主用了两性霉素后细胞怎么样？

ALALA[使用道具]
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发表于 2015-12-11 10:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

您好，我看到您发的白色念珠菌污染的图片，我现在也怀疑自己的细胞有白色念珠菌污染，主要表现是：镜下观察细胞周围或者表有透亮的颗粒，发一个图片你帮我看看，好吗？谢谢了，不胜感激。

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2015-12-11 10:52