【求助】流式细胞术检测细胞周期和凋亡

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标题:【求助】流式细胞术检测细胞周期和凋亡

11_hjx[使用道具]
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发表于 2015-12-11 14:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问各位战友一个很菜的问题:我的实验是不同的药物浓度对肿瘤细胞凋亡的影响,我想用流式细胞术检测细胞周期,那么是应该检测同一药物浓度不同时间段对细胞周期的影响呢?还是应该检测不同的药物浓度在相同作用时间对细胞周期的影响?我看文献中这两种做法都有,这良种方式有什么不同的意义吗?
还有我还使用AnnexinV/FITC方法检测细胞凋亡,还是上面的问题,我该采用哪种方式呢?谢谢大家!

bojitu[使用道具]
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发表于 2015-12-11 14:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

最好都做.
先做不同的药物浓度在相同作用时间对细胞周期的影响
然后选择一个合适的浓度做不同时间段对细胞周期的影响
这要看你的实验目的是什么了

xevin[使用道具]
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发表于 2015-12-11 14:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

实际上两种都有意义，都能说明问题，一般来说浓度应该优先考虑一些吧。但都因该有个“度”的问题，浓度过大或者时间过长都没有临床意义的，而浓度应该是在试验开始时做MTT的筛选出来的。我刚刚做完这个实验，PI单染和Annexin-V-FITC/PI双染都做了，效果还行。我就我的试验说一下吧，周期我做的不同药物浓度作用24小时后的改变，应该就可以了。Annexin-V-FITC/PI双染检测凋亡我做的也是药物作用后24小时，结果很理想，所以我就不打算再做48小时的了。
需要注意的是：1、如果你的药物是作用于细胞的G0/G1期，如果药物作用后存在一定的细胞凋亡的话，你做PI单染就能做出凋亡峰，不用再做双染了，试剂盒也挺贵的，但最好做作用后48小时的，效果会更明显些。但如果是作用于G2/M期的话，比如象紫杉醇等，则普通PI单染很难检测到凋亡峰，而Annexin-V-FITC/PI双染就可以。
2、贴壁细胞做Annexin-V-FITC/PI双染检测凋亡时，胰酶消化时对细胞的损伤会造成一定的假阳性，使阳性率偏高，用空白对照细胞做流式细胞仪调零时要注意到这一点。

11_hjx[使用道具]
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发表于 2015-12-11 14:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

再请问上面的战友,你选定浓度的时候一般是选择IC50附近的浓度来进行细胞周期检测吗?

loli[使用道具]
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发表于 2015-12-11 14:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

Annexin-V-FITC/PI双染试剂盒买的什么公司的呀，多少钱？

11_hjx[使用道具]
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