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标题:【求助】Matrigel基质胶成血管实验

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发表于 2015-12-12 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】Matrigel基质胶成血管实验

各位大侠，小弟最近在做Matrigel基质胶成血管实验，经过几次摸索，现在基本能出现HUVEC形成管状结构，但是现在遇到2个问题，特向各位前辈求助.
问题一：铺Matrigel胶总是无法铺的很平整，我使用的是96孔板，分别按照每孔30ul，40ul，50ul 都尝试过，要么就是有气泡产生，要么就是铺胶不平，在显微镜下照相很难对焦。
问题二：我想给基质胶上的HUVEC染上荧光，请问如何实施呢？我这边有同学馈赠的DAPI染料，是否可以实现荧光染色？
我的电话02762915589，有哪些同志们有好的方法，请指教，非常感谢！也乐于和准备做此类实验的同道交流！
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qqq111[使用道具]
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发表于 2015-12-12 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
Matrigel无法铺得绝对平，总是一个凹液面的，即中间底周围高，孔越小，这个问题越明显。建议铺胶后不要立刻把多孔板放进培养箱，而是继续放在冰上20min，同时放个小水平仪在多孔板盖子上，以确保板放平，这样可以让胶在未固化前尽量平。然后再放进培养箱中。如果觉得这个问题还是不能解决，就建议换48孔板，胶和cell的量按比例放大，由于孔的面积大了，使得胶面积大，拍照也方便些。
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发表于 2015-12-12 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

多谢前辈指导！
下周准备用24孔板试一下
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发表于 2015-12-12 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我还是建议你用96孔板
要铺好，关键是你的matrigel要野花好。最好少在4度过夜液化，而且你的枪头要4度预冷。
我的经验是96-well plate是60ui/well。
matrigel液化后用枪头直接吸进去，加到板底，注意用移液枪打出来的时候不要打到底，因为打到底往往就产生气泡。
在手上稍微晃晃，能很好的铺平。
如果用24weii plate的话，如果matrigel液化不好的话，很难在板底铺平，因为24孔板的底面积更大了，要铺开跟干部容易
成管实验还是很简单的
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发表于 2015-12-12 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

BD Matrigel细胞外基质胶,货号:356234, rmb 1990.00/5ml
6.5mm transwell with 8.0um prore polycarbonate membrane insert,costar 24孔板/人民币450.00/块
原装进口试剂,1周到货. f32-xx@163.com/tel:010-81867625,请留下联络方式方便联系…
关于BD公司的matrigel的保存问题,可以来电探讨...
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发表于 2015-12-12 17:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问做完成管实验后，想从matrigel上的细胞提取蛋白怎么提呢，谢谢啊
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发表于 2015-12-12 17:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

BD公司有裂解液的
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发表于 2015-12-12 17:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以稀释一下的，摸索一下，一倍或者2倍吧
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发表于 2015-12-12 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问哪位大侠做过matrigel体内形成血管的实验啊?求指教
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发表于 2015-12-12 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你用的Matrigel是356234吗？需要稀释吗？可以发几张照片看看吗？多谢多谢哈
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