细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】lipo2000转染问题

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:【求助】lipo2000转染问题

iii_ii[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114477
精华 0
积分 420
帖子 479
信誉分 100
可用分 3229
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
1
 

【求助】lipo2000转染问题


相关疾病:
乳腺癌
lipo2000转染乳腺癌细胞系(MCF-7ADR),转染四次了,转染效率很低,且 转染完第四天细胞大部分都死了。急切得到大家的帮助,谢谢!
顶部
iii_ii[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114477
精华 0
积分 420
帖子 479
信誉分 100
可用分 3229
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
2
 

补充一下,转染时没用invitrigen推荐的条件培养基,用的是无血清无抗生素的1640培养液。
顶部
ero11[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75131
精华 0
积分 684
帖子 1028
信誉分 100
可用分 5953
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态 离线
3
 

你按lipo2000说明书操作就ok了 ,mcf/adr比较好转染的
顶部
555444[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 118099
精华 1
积分 359
帖子 413
信誉分 102
可用分 2836
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-12-9
状态 离线
4
 

Lipofectamine 2000具有较强的细胞毒性。
如果是细胞系转染,建议在加入Lipofectamine 2000后2-4小时换液,往往能取得不错的结果。
另外厂家推荐的转染试剂使用量似乎偏高,建议少用。
顶部
gogo[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77052
精华 0
积分 821
帖子 1341
信誉分 100
可用分 7487
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
5
 

转染时用无血清无抗生素的1640培养液是正确的,关键是你转染的时间太长了,一般情况在转染后4到6小时,应去掉转染试剂,加入含有血清的1640继续培养24 小时,这样才能继续后面的实验,Lipofectamine 2000还是很好用的。你可同时做个对照组,转染一个荧光蛋白进去,观察转染的效率!
顶部
iii_ii[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114477
精华 0
积分 420
帖子 479
信誉分 100
可用分 3229
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
6
 

我是转染了一个绿色荧光蛋白,转染效率特别低,且四五天后细胞都死了。谢谢!
顶部
gogo[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77052
精华 0
积分 821
帖子 1341
信誉分 100
可用分 7487
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
7
 

你具体是怎么做的实验,还是把实验经过写详细点,很难帮你做出判断,在你没转染前你的细胞状态怎么样??
顶部
yayya[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114491
精华 0
积分 392
帖子 483
信誉分 100
可用分 3138
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
8
 

请问一下:
转染4-6小时后一定要换液吗?说明书上好象说可以不换的。另外,转染过程中好象有血清也可以的。是不是呀?
顶部
8s5g[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77636
精华 0
积分 469
帖子 538
信誉分 100
可用分 3626
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-19
状态 离线
9
 

MCF-7很好转,转个5,6K的质粒效率都很高
1 )用lipo2000转,转染前细胞状态一定要好,lipo2000也不是一定只转增殖细胞,但是在转染前几个小时换个液刺激一下是个不错的主意。
2) 我用lipo2000转染大多数细胞的经验是有血清比无血清要好,你可以自己去试。
3) 关于换液的问题,像MCF-7之类的细胞系对质粒带的内毒素都不太敏感,lipo确实有那么点毒性,减半不会显著降低效率。而我对这类细胞从来都不换液,因为没差别。
4) 效率低可能的原因很多。就质粒而言,质量一般问题不大,主要是量的问题,不知你定量准不准,如果加大质粒量能提高效率,那么有可能你的质粒纯度不行,影响读数,这里就不多说了。
顶部
toy[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77357
精华 0
积分 716
帖子 1052
信誉分 100
可用分 6165
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
10
 
我做蛋白表达的检测,我想问问lip2000转染48小时就可以检测了吗?
顶部