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MCF-7很好转,转个5,6K的质粒效率都很高
1 )用lipo2000转,转染前细胞状态一定要好,lipo2000也不是一定只转增殖细胞,但是在转染前几个小时换个液刺激一下是个不错的主意。
2) 我用lipo2000转染大多数细胞的经验是有血清比无血清要好,你可以自己去试。
3) 关于换液的问题,像MCF-7之类的细胞系对质粒带的内毒素都不太敏感,lipo确实有那么点毒性,减半不会显著降低效率。而我对这类细胞从来都不换液,因为没差别。
4) 效率低可能的原因很多。就质粒而言,质量一般问题不大,主要是量的问题,不知你定量准不准,如果加大质粒量能提高效率,那么有可能你的质粒纯度不行,影响读数,这里就不多说了。