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标题:【讨论帖】鼠尾胶原制备

ukonptp[使用道具]
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发表于 2015-12-12 21:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【讨论帖】鼠尾胶原制备


鼠尾胶原（collegen）：常用的包被培养皿的基质。
1。75％酒精浸泡大鼠尾巴30min；
2。将尾巴剪开、去掉皮毛，并剪成小段，抽出银色的尾键；
3。把剪碎的尾键置于150ml，0.1％消过毒的醋酸中，4℃放置，并不时振荡；
4。48h后取上清，4000转离心30min后，取上清；
分装上清（鼠尾胶）4度保存。
有时可继续向4。中沉淀中加入10－20ml醋酸，重复以上步骤，以制备更多的鼠尾胶。
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qianqin1977[使用道具]
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发表于 2015-12-12 21:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这只是书上这么写，我在实际操作中遇到一些问题，不知有没有谁做过鼠尾胶原制备。
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ukonptp[使用道具]
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发表于 2015-12-12 21:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不光是书上的，我们科里的鼠尾胶原都是这样配的！
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lorri[使用道具]
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发表于 2015-12-12 21:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 qianqin1977 于 2015-12-12 21:20 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
这只是书上这么写，我在实际操作中遇到一些问题，不知有没有谁做过鼠尾胶原制备。

应该没什么大问题吧，我遇的唯一问题就是抽尾键的时候比较费劲Big Smile
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utt0989[使用道具]
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发表于 2015-12-12 21:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

偶前几天刚做过一次，抽尾腱时可是把偶好一顿累，一定要用齿镊抽，否则非累个半死。制作全过程都要注意无菌！因为制备好之后的鼠尾胶原是无法用过滤来除菌的。
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发表于 2015-12-12 21:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有几点不懂：1，不时振荡怎样进行，尤其晚上。
2，这样制备出来胶原浓度多少，
另外，查到SIGMA公司有卖：C-7661.但好象太贵，粉剂5mg35.8美金，是用
0.1N醋酸配成1mg/ml，他们建议使用6-10 µg/cm2.所以不知自己制备的相当于粉剂
大约多少mg？
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发表于 2015-12-12 21:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

另外，为了使细胞易于附在支架材料上，除了用鼠尾胶原，不知用明胶或多聚赖氨酸处理效果如何，有那位试过吗？
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mybioon[使用道具]
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发表于 2015-12-12 21:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
问一个笨问题，冰醋酸和醋酸是一种吗，配鼠尾胶原应如何消毒。
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tewank[使用道具]
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发表于 2015-12-12 21:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

多聚赖氨酸我试过，效果不好。可以高压灭菌消毒后保存。
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ukonptp[使用道具]
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发表于 2015-12-12 21:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 mybioon 于 2015-12-12 21:28 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

有几点不懂：1，不时振荡怎样进行，尤其晚上。
2，这样制备出来胶原浓度多少，
另外，查到SIGMA公司有卖：C-7661.但好象太贵，粉剂5mg35.8美金，是用
0.1N醋酸配成1mg/ml，他们建议使用6-10 µg/cm2.所以不知自己制备的相当于粉剂
大约 ...

用摇床；
浓度我也不清楚；
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=445075&sty=1&tpg=1&age=0')
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