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标题:【求助】磁珠分选

子衿青青[使用道具]
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发表于 2015-12-12 21:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】磁珠分选


求助各位战友，美天旎免疫磁珠分选buffer具体的配制？还有就是我用MS柱，如果细胞总数小于10×7是不是依然用500ul重悬细胞过柱？MS柱在无菌的情况下是不是可以重复利用？非常感谢
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october7[使用道具]
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发表于 2015-12-12 21:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可能这位同行没细看美天旎的磁珠分选的Protocol，上面有具体的buffer的配制方法，我要是没记错的话，应该是PH=7.2的PBS+0.5%的BSA+2mM的EDTA，如果你再仔细看的话，buffer的配制下面还有一个Note，上面写了人血白蛋白可以用其他一些蛋白代替，比如人血白蛋白、胎牛、小牛血清，而EDTA又可以用其他代替的！请仔细查看！
细胞总数少，还是要用500ul的buffer重悬的！个人认为磁珠分选，基础细胞量还是要多一点，10x7的细胞量并不是很多，不知道你要分什么细胞，如果你的阳性细胞比例不是非常高，这样你分出来的阳性细胞量就会很少，还有要是准备用这个阳性细胞细胞做下一步实验，细胞量会不够的，当然你仅仅做下预实验就另当别论了！
可能你还没有做过磁珠分选，这种MS柱是很容易被细胞堵住的，有时一次可能要用好几根柱子的！不晓得你说的“MS柱在无菌的情况下是不是可以重复利用？”是什么意思？是指MS柱分选完了后再消毒重新用？呵呵，我没这么做过，觉的行不通，因为MS柱最下面那个黑色的（应该算是铁制的吧）部分，里面都是高分子材料，允许细胞通过的空间不大啊，分选一次细胞，总会有细胞残留柱子里，这样就算能够下次重新用，那留给以后分选的细胞空间又会有多少呢？要是分选不同的细胞，是不是会造成细胞污染呢，虽然上次分选的细胞早已经死掉了！所以我建议还是不要重复用！
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发表于 2015-12-12 21:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

磁珠分选的BUFFER我的柱子，也是自己配制得，就像楼上说的那样的方法，感觉也还好的。同意楼上的观点，MS柱子是很容易堵的，第一步选择建议还是用LD，这样的细胞的纯度会高些。
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发表于 2015-12-12 21:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
PH=7.2的PBS+0.5%的BSA+2mM的EDTA????没有具体比例啊战友，最近做的磁珠分选都失败了，怀疑Buffer配方有问题，请战友们指导，呵呵
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prettygirl@[使用道具]
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发表于 2015-12-12 22:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
PH=7.2的PBS+0.5%的BSA+2mM的EDTA????

======================================================================

0.5%是指100ml里的浓度吗？2mM是什么意思啊？是怎么调的呢，能不能举例一下，非常感谢！
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04906[使用道具]
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发表于 2015-12-12 22:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最近也想做人外周血的CD+8T细胞的免疫磁珠分选,Buffer的配制问题也有点不清楚，望有经验的师兄、师姐指点迷津，谢谢啦，
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yyaxw84[使用道具]
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发表于 2015-12-12 22:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 prettygirl@ 于 2015-12-12 22:01 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
PH=7.2的PBS+0.5%的BSA+2mM的EDTA????

======================================================================

0.5%是指100ml里的浓度吗？2mM是什么意思啊？是怎么调的呢，能不能举例一下，非常感谢！ ...

指的是2mmol/L，浓度。
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yyaxw84[使用道具]
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发表于 2015-12-12 22:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 yyaxw84 于 2015-12-12 22:03 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

指的是2mmol/L，浓度。

0.5%的BSA: 0.5g BSA/100ml buffer
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yayya[使用道具]
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发表于 2015-12-12 22:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

200mlPBS+1gBSA+0.148gEDTA即可，不用调PH
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dreaming[使用道具]
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发表于 2015-12-12 22:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

呵呵，我们用MS和LD柱都是重复利用过十几次的，跟新柱子做过比对，木有差别。每次分选完用buffer反复冲洗柱子几遍后用无水乙醇冲洗几遍，再放入有无水乙醇容器里完全浸泡（一定要无水，不然就会生锈），等做完实验再拿出来把柱中的无水乙醇打出，放置到一个小铁饭盒里拿去高压灭菌，在放到干燥箱里干燥就可以了，下次用的时候再拿到超净台里打开铁饭盒，用无菌镊子取出继续利用
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