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标题:Light Cycler与Realtime PCR仪有什么区别?

flower-201[使用道具]
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Light Cycler与Realtime PCR仪有什么区别?

Light Cycler与Realtime PCR仪有什么区别?


Light Cycler与我们所说的Realtime PCR仪(比如ABI 7***)有什么区别?搞不懂的说,请教各位!
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@花开花落@[使用道具]
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Light Cycler PCR仪是罗氏医学仪器公司研发出的实时侦测同步定量的聚合酶连锁反应器(On line, real time PCR--LightCycler)。其目的是精确的定量出所表现的基因数量,解决有关PCR过程中拷贝数量化的问题。
Realtime PCR仪中文名称叫实时荧光定量PCR仪,也是通过实时检测PCR反应中的荧光强度来确定靶片段的拷贝数。
这两种PCR仪在原理上是一样的,只是前者是罗氏的专利产品,而后者则有多个公司的产品。
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两种仪器在原理上没任何区别,但是在实际操作中差异较大,Realtime PCR仪一般使用PCR管,而Light Cycler PCR仪是用特制的石英管,耗材贵,灵敏度高,反应快。
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Realtime PCR只是一种方法,不是仪器名。Roche 的Lightcycler和ABI的7000,7700,7900和ABI新的7300,7500都是属于Realtime PCR仪器。BioRad的Icyler也是realtime PCR仪器。Lightcycler使用空气升降温,速度快,但只能处理36个样品。ABI的是用的半导体原理,孔间有较多差异,反应时间长,但可以扩96个样品。各有利弊。  
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Realtime PCR只是一种方法,不是仪器名。Roche 的Lightcycler和ABI的7000,7700,7900和ABI新的7300,7500都是属于Realtime PCR仪器。BioRad的Icyler也是realtime PCR仪器。Lightcycler使用空气升降温,速度快,但只能处理36个样品。ABI的是用的半导体原理,孔间有较多差异,反应时间长,但可以扩96个样品。各有利弊。  
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罗氏的LIGHTCYCLER有一些优点,他采用毛细管,壁薄,管子很长一般用20微升体系,长度可达4,5个厘米,这样其表面大,采用空气加热可以很快使管内温度达到预定的温度,所以其比普通的PCR反应时间短的多,一般只要3到5秒(变性和退火),而且测定荧光强度时,我觉得激发光通过的路程长,可以激发更强烈的荧光。(但是我发现其毛细管并不一致,有的管径稍大,其长度就短点,不知道对于荧光值测定有没有影响。)
另外,其采用一个光路测定所有的毛细管的荧光值,这样可以保证同一光路的强度一致,而不会出现偏差。(其他好象是多个测定光路,难保光路之间有偏差,罗氏的好象叶有其他光路,但是用来测第2,3荧光的)。
另外其缺点叶有,譬如一个毛细管国产的都要4,5元钱一个,而且,在毛细管里的产物想拿出来跑电泳验证产物长度都不好办。
我用LIGHTCYCLER不久,有些看法不一定正确,欢迎大家来讨论
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小米虫子[使用道具]
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目前毛细管(进口)一般成交价在5元左右,我看到过国产的,好像只有1.5元,质量尚可!
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国产的毛细管在哪可以买到?最好提供联系方式。进口的管好象太贵了,做一次就心痛一次。
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coolcool[使用道具]
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国产的毛细管在哪可以买到?最好提供联系方式。进口的管好象太贵了,做一次就心痛一次。
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年轮[使用道具]
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各位用Light Cycler PCR仪使用的是专门的试剂盒吗? 我想用做普通PCR的试剂盒(TAKARA公司)加SUBY Green 1可以吗? 我试了两次都未做出来,跑点泳后没有目的条带,action也没有,(我用普通的PCR仪做的挺好的),不知是何原因,向各位请教。谢谢!
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