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标题:急问 ： PCR结果目的条代弥散的原因

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发表于 2011-10-4 14:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

急问 ： PCR结果目的条代弥散的原因

急问 ： PCR结果目的条代弥散的原因 [转载]


请问PCR结果目的条代弥散的常见原因是什么？该怎么优化？
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快乐的大脚[使用道具]
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发表于 2011-10-4 14:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
PCR结果目的条代弥散可能的原因有以下几点：
1）PCR反应特异性不强，非特异性条带多呈弥散现象，如果是这样的话，你可以调整PCR条件，采用热启动和TOUCH-DOWN PCR来减少非特异性产物。
2）配胶的时候要让胶充分融化，如果融化不好的话也会出现条带弥散的现象。
3）配制胶的缓冲液要和电泳缓冲液相一致。
4）其它可能就是上样缓冲液的问题。
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发表于 2011-10-4 14:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的情况是这样，同一管模板，昨天做B－ACTIN PCR后电泳，目的条带清晰高亮，无任何杂带；冻于－20度，可是今天又用它做一次B－ACTIN PCR后电泳，目的条带却有些弥散，亮度弱了，实在找不到原因，请JINKUI960战友帮忙分析一下，谢谢啦
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发表于 2011-10-4 15:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
模板最好不要反复冻溶，有可能降解  
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菠萝菠萝蜜[使用道具]
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发表于 2011-10-4 15:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
建议做一个阳性对照，就是空跑你的模板看模板是否弥散或模板降解，这样可以有助于你下一步实验
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发表于 2011-10-4 15:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
摸板是POLYA CDNA的集合，，那跑出来肯定是很多带吧？能看出什么来呢？
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发表于 2011-10-4 15:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
摸板是POLYA CDNA的集合，，那跑出来肯定是很多带吧？能看出什么来呢？
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发表于 2011-10-4 15:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我碰到过一种情况，刚跑出来的胶，条带本来很清晰，可是10分钟后就眼睁睁的在眼前散掉了，后来更换电泳液再跑一次就好了。后来也多次发现，电泳液使用时间过长会导致条带变暗。  
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发表于 2011-10-4 15:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
"刚跑出来的胶，条带本来很清晰，可是10分钟后就眼睁睁的在眼前散掉了，后来更换电泳液再跑一次就好了。后来也多次发现，电泳液使用时间过长会导致条带变暗。"

电泳液用的时间长了,效果会变差.但是,你说的凝胶放置10分钟后条带变得弥散并不一定完全是由于电泳液用久的原因导致的,因为,即使新更换的电泳液,断掉电源之后,凝胶只要稍稍放置,条带就会变得模糊, 我觉得,这主要是由于没有电场的作用下,条带中的DNA做非定向运动所致.
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发表于 2011-10-4 15:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
条带在空气中比在缓冲液中更容易扩散，所以做完电泳如果想让条待继续保存一小段时间，最好依然放在缓冲液中，个人感觉比冻在冰箱里都好
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