合成引物的问题，急~求助！

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标题:合成引物的问题，急~求助！

lixi559[使用道具]
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发表于 2011-10-4 16:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

合成引物的问题，急~求助！

上个星期六
做pcr结果很好。
后来由于一个引物用完重新合成了该引物（只是一条）。
用该引物连续三次做
第一次没有结果（质粒做的模板）
第二次条带很差模糊（质粒不行，pcr产物做的模糊）
第三次，没有结果。
该引物为兼并引物，兼并度1 /96.
难道合成引物有问题？
其他的条件都没有变。
生工合成的，有没有类似经历的高手啊
我如果找他们该怎么说？我急着pcr等结果，第一次碰到这种情况。
合成时间不到一个月

+田田+[使用道具]
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发表于 2011-10-4 16:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果其他条件没有变，应该是引物的问题！我们有过一次，是引物合成错误！请你与上次的引物核对！

冰激凌小姐[使用道具]
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发表于 2011-10-4 16:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

给的引物单子好像没有错误啊。

阿拉蕾[使用道具]
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发表于 2011-10-4 16:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

不能看引物单子，有条件的话自己用聚丙烯酰胺凝胶电泳或者测序仪看一下。不过说实话那还不如和公司联系重订一个呢
而且我以前也遇到过类似的问题，pcr的产物切不开，怀疑是引物的问题，但后来用我们实验室的测序仪测序发现引物合成的没有问题
你应该再确定一下你的体系有无问题，特别是酶和模板

幽兰君[使用道具]
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发表于 2011-10-4 16:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

和我遇到的情况一样，今天发现和我的酶有关，以前的酶用完了换了一只就什么也没有了，只有smeal。可以重换条件再试试，把退火温度降一点看看，我也在重新试条件，很郁闷，好不容易有产物了又丢了。祝好运吧。

lixi559[使用道具]
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发表于 2011-10-4 16:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可是我得所有的东西都是没有变化的啊
酶同一管的
buffer 同一管的
模板同一管的
引物一同一管的
引物二新合成的
只是时间上隔了24小时而已
我现在急需这批pcr产物做探针，或者pcr验证。
可是没有了结果，唉不知道什么时间才能重新再来。
今天给生工电话，那面说重新合成一次。
别的什么都没有说？难道这种情况很普遍，连问以下具体情况都不需要

锤子[使用道具]
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发表于 2011-10-4 16:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

不能看引物单子，有条件的话自己用聚丙烯酰胺凝胶电泳或者测序仪看一下。不过说实话那还不如和公司联系重订一个呢
而且我以前也遇到过类似的问题，pcr的产物切不开，怀疑是引物的问题，但后来用我们实验室的测序仪测序发现引物合成的没有问题
你应该再确定一下你的体系有无问题，特别是酶和模板

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兼并引物可以测序吗？
小弟菜鸟，请指示

lixi559[使用道具]
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发表于 2011-10-4 16:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

兼并引物可以测序吗？

当然可以呀，只要用你pcr时用的引物就可以了！

小蜜蜂[使用道具]
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发表于 2011-10-4 16:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

何谓兼并引物,请指点,谢谢.

阿拉蕾[使用道具]
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发表于 2011-10-4 16:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

兼并引物是指代表编码单个氨基酸所有不同碱基可能性的不同序列的混合物。为了增加特异性，可以参考密码子使用表，根据不同生物的碱基使用偏好，减少兼并性。次黄嘌呤可以同所有的碱基配对，降低引物的退火温度。

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