小中大影响PCR产物的量的因素有很多:
1)PCR的体系组成的合理,尤其是适宜的引物和模板的浓度,如果某种成分的量加大或减少都会显著的影响PCR的产量和特异性;
2)合适的模板浓度:起始模板的量对于获得高产量很重要。对大多数扩增满意,104到106个起始目的分子就足以在溴化乙锭染色胶上观察到,所需的最佳模板量取决于基因组的大小;
3)酶的选择:除了使用高质量模板DNA,聚合酶的选择也会影响产量;
4)PCR反应体系的组成,如酶离子的浓度等也会显著影响 ;
5)PCR条件,如引物的退火温度选择对提高PCR试验的灵敏度和产量也非常关键;
6)如果PCR产量较低的话,你也可以通过二次PCR来提高产量,即把第一次的PCR产物适当稀释,再以它作为模班进行PCR,同时你也可以通过TOUCH-DOWN PCR来提高PCR的特异性和产量。
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