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化学发光法测定雌二醇（一）

关键词：食品添加剂检测  环境监测标准物质  水质标准样品  无烟煤成分分析
    【实验原理】
    雌二醇(estradiol-17β，E2)采用竞争性结合酶免疫法检测。样品中待测抗原E2和碱性磷酸酶标记的E2(ALP-E2)与抗E2抗体的结合位点竞争性结合，形成的抗原．抗体复合物再通过捕捉抗体结合到磁性颗粒表面；反应管被传送到磁性分离区域进行多次冲洗，去除未和固相结合的其他成分；最后，向反应管中加入化学发光底物(AMPPD)，该反应所产生的光子被光电比色计所检测。光子的产量与样品中的E：浓度成反比，对照仪器中储存的多点校正曲线中所描述的光量子与标准品E2的对应关系而计算出样品中的E2浓度。
  【试剂与器材】
  购买成套的商品试剂盒。
  1．R1试剂盒 现成可用。所有抗血清均为多抗，除非有专门说明。包括：
  (1)R1a：含包被有羊抗兔IgG的磁性颗粒，含兔抗E2的Tris缓冲液，小牛血清白蛋白(BSA)，低于0．1％的叠氮钠。
    (2)R1b：Tris缓冲液，NaCl，小牛或羊血清白蛋白(BSA)，低于0.1％的叠氮钠。
    (3)Rlc：E2-碱性磷酸酶结合物，兔血清白蛋白(BSA)，低于0.1％的叠氮钠。
    试剂盒在2～10℃冰箱中顶端朝上存放；必须在2～10℃冰箱保存2小时后才能放入仪器中使用或保存；若在2～10℃保存，试剂在有效期内稳定；试剂盒被吸取使用后，在2～10℃条件下可稳定14天；橡胶层破坏或质控结果超出范围等现象出现即代表试剂盒失效。
    2．E2定标品  现成可用。使用前轻轻颠倒混匀，避免产生气泡，在2～10℃环境下可稳定到定标品瓶标签上标出的失效期。质控结果落到允许的范围之外是定标品失效的信号。定标操作步骤参见免疫分析系统的操作指南和参考手册。包括：
    (1)S0：人血清，低于0．1％的叠氮钠和0．0125％Cosmocil CQ，含有0．0pg/ml(0．0pmol/L)的E2。
    (2)S1，S2，S3，S4，S5：人血清中含E2浓度大概为100pg/ml、500pg/ml、1500pg/ml、2500pg/ml及3600pg/ml(大概367pmol/L、1836pmol/L、5507pmol/L、9178pmol/L和13 216pmol/L)，低于0.1％的叠氮钠和0．0125％Cosmocil CQ，准确浓度详见瓶上标签。
    (3)定标卡：定量检测的定标是用已知分析浓度的样本进行检测以观察光量子值。光量子值和已知浓度之间的数学关系就构成了校正曲线。校正曲线储存于仪器中，可将样本检测中得到的光量子值转化成特定的分析浓度。
3．R2底物现成可用。储存条件和稳定性见表，底物本底检测值的增高提示底物的不稳定。
R2底物包含有AMPPD、荧光素和离子表面活性剂量。按照仪器操作指南中介绍的使用方法使用。
    4．冲洗缓冲液现成可用。在室温条件下(15～30℃)可稳定到包装上注明的失效期。底物本底检测值的增高或在双抗体夹心法中的0点定标品的相关发光值的增高则提示冲洗缓冲液的不稳定。
    R3冲洗缓冲液：缓冲液，离子表面活性剂，低于0．1％的叠氮钠和0．1％ProClin 300。按照仪器操作指南中介绍的使用方法使用。
    5．质控品  商用质控血清(异常浓度和正常浓度值)。
    6．仪器    免疫分析系统和消耗品。