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标题:[求助]PCR有杂带,怎么办?

小螺号[使用道具]
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发表于 2011-10-7 15:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]PCR有杂带,怎么办?

[求助]PCR有杂带,怎么办?


曾今做出过没有杂带的,可是过了两个星期,做同样的东西,同样的条件,只是换了一台PCR仪,就一直做的都有杂带,大家教一下我该怎么办呀?
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applebook=213[使用道具]
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发表于 2011-10-7 15:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
提高退火温度，不出来你找我！  
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wu11998866[使用道具]
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发表于 2011-10-7 15:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
也可以将复性时间稍微减短试试看  
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wu11998866[使用道具]
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 小中大
也可以将复性时间稍微减短试试看  
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小螺号[使用道具]
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 小中大
谢谢大家,我现在的条件是90度30秒,58度30秒,72度1分钟,38个循环,还有什么需要改进的没有呀?
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8黑眼圈8[使用道具]
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 小中大
一般复性温度低于Tm值5度，有杂带的时候甚至升高到高于Tm值几度有时都可以扩增出。有时同一台仪器同样的条件都会有不同的结果。
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冰激凌小姐[使用道具]
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发表于 2011-10-7 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
试一试热启动了,感觉挺有用的!
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明天的明天[使用道具]
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发表于 2011-10-7 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也是有一对引物，做得好好的，显现却总是出现拖尾现象，弄了半天也没弄好。不知你的最后怎么样了？  
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小螺号[使用道具]
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发表于 2011-10-7 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
听了大家的建议,我将条件改为94度30秒,59度45秒,72度1分钟,做出来目的条带亮度增加了,可是仍然有清晰的杂带,再将延伸时间缩短为45秒,杂带的亮度反而增加了,请教各位再怎么改进一下呢?还能不能升高退火温度?
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碧空子[使用道具]
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发表于 2011-10-7 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你试试热启动 95度5分钟 我上次做有杂带 体了5度才没有了 如果你的目的基因比较好出 你也可以试试TD-PCR 还有我想你的CYCLE太多了 你做32或34 试试
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