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标题:[求助]关于酶切

mogu[使用道具]
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发表于 2011-10-7 15:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]关于酶切

[求助]关于酶切


俺也想做酶切。但是说明书上给出的要求是DNA底物为1微克，这真是难为人，谁帮俺定定量呀？
还有说明书上给出的要求限制性内切酶用量为2－4单位，但试剂商提供的酶原液就是8－20单位/微升，这这么取呀？
多谢帮忙！
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8黑眼圈8[使用道具]
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发表于 2011-10-7 15:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
0.2-2微升的枪你没见过？
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98776langtao[使用道具]
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发表于 2011-10-7 15:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
万事要以说明为参考，但不能全部按说明办，底物的量还是按酶切效率定，如果酶切效果不好，那就加大底物量，我今天就10ul底物，所以具体问题具体分析。你可以做个梯度逐渐加量，就没问题了。至于酶也一样，我们一般用0.7ul酶，也可以稍微改变，最多没超过1ul。
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发表于 2011-10-7 15:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
BACTERIA11 太夸张
这也搞梯度
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+田田+[使用道具]
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发表于 2011-10-7 15:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
为什么不可以呢，出结果是我们的目的，难道眼看着不解决么。
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发表于 2011-10-7 15:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
梯度太费了
没必要
其实按活度算算就行
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发表于 2011-10-7 15:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
酶切我作过条件的摸索，包括酶切时间和酶的使用量，但意义好像不是很大，虽然文献中说酶切时间16h，虽然这个时间我没试过，但2h好像也行阿！大家怎么看阿？
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发表于 2011-10-7 15:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
酶切我作过条件的摸索，包括酶切时间和酶的使用量，但意义好像不是很大，虽然文献中说酶切时间16h，虽然这个时间我没试过，但2h好像也行阿！大家怎么看阿？
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发表于 2011-10-7 15:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
加酶0.5微升，约4－15个单位（说明书提供浓度8－30单位/微升，这样的说明好恐怖），抚育了1、2、3、4、5、8小时，还是PCR产物的清晰条带，一点没有切开，怎么回事？酶无效？还是这个患者就是没有该位点的突变呀？救助
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发表于 2011-10-7 15:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
弄个肯定能切动的阳性对照
另外，多少被切成多少和多少？
是否涉及甲基化？
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