小中大我自己用的是盐析法,但有一步蛋白酶K消化过夜的过程,所以并不快,下面的方法是转贴的,我自己没有用,可是确实是。。。快
外周血DNA提取方法(protocol)
从300μl全血中分离DNA
时间:45分钟
预期产量:5-15μg DNA
细胞裂解
1. 将300μl全血(或骨髓)加入盛有900μl红细胞裂解液的1.5ml的微型离心管中。翻转使其充分混合,在室温下孵育10分钟。在孵育期间至少翻转离心管一次。
2. 在13,000-16,000g下离心20秒钟,用一支移液管移走悬浮液,留下可见的白细胞层和10-20μl的残液。
3. 猛烈震荡试管,使残液中的细胞悬浮。
4. 将300μl细胞裂解液加入悬浮的细胞中,用移液管混合,通常不需要孵育。若混合后细胞环可见,在37℃或室温下孵育直至完全裂解。室温下,样本可在细胞裂解液中稳定保存至少18个月。
溶解DNA
1. 将100μlDNA溶解液加入离心管中(若总产量为10μg/DNA,浓度可为100μg /ml)
2. 将样本于65℃孵育1小时或/和室温下过夜,以使DNA溶解,有规律地轻拍离心管以帮助DNA的分散。
3. 于4℃下储藏DNA,若欲长时间存放,置于-20℃或-80℃储存。
蛋白质沉淀
1. 使样本降至室温
2. 将100μl蛋白沉淀液加入到细胞裂解液中。
3. 快速震荡试管20秒钟,使二者充分混合。
4. 于13,000-16,000g离心3分钟。沉淀的蛋白质应该形成一个紧密的,暗棕色的片层。若其不够致密,重复步骤3,在冰块中孵育5分钟,然后再重复步骤4。
DNA沉淀
1. 将含有DNA的上悬液倒入一个干净的含300μl 100%异丙醇的1.5ml微型离心管中。
2. 轻轻翻转试管50次以混合样本。
3. 于13,000-16,000g离心1分钟,DNA呈现为一白色片层。
4. 将上悬液弃置,将试管倒扣在一张干净的滤纸上,使液体自然流干。加入70%乙醇,翻转试管数次,以充分洗净DNA层。
5. 于13,000-16,000g离心1分钟,仔细弃置乙醇。DNA环可能松散,因此请务必小心仔细。
6. 使试管倒扣在一张干净的滤纸上,使乙醇自然流干。也可于空气中放置10-15分钟使其晾干。