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标题:[求助]条带太暗，怎么回事？

sunshine039[使用道具]
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发表于 2011-10-8 11:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]条带太暗，怎么回事？

[求助]条带太暗，怎么回事？


我在做PCR的时候条带总是很暗，几乎看不见，不知怎么回事！
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Darcy[使用道具]
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发表于 2011-10-8 11:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
分析:
原因可能是多方面的,举几个吧!
1,引物设计不合理;
2,模板量太少;
3,Taq酶失活或反应条件不太合适;
自已将整个过程好好考虑。最好是在师兄的成功反应下再结合实验与看书摸索条件！！！
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sunshine039[使用道具]
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发表于 2011-10-8 11:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的模板量是25ul体系里含400ng.
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@花开花落@[使用道具]
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发表于 2011-10-8 11:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
建议重摸最佳退火条件，增加pcr反应的循环数，延长EB染色时间，祝早日见到你的条带
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sunshine039[使用道具]
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发表于 2011-10-8 11:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢两位，退火温度我也摸过52－56度，但是没有明显的差别。  
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sunshine039[使用道具]
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发表于 2011-10-8 11:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢两位，退火温度我也摸过52－56度，但是没有明显的差别。  
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HOT兔[使用道具]
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发表于 2011-10-8 11:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以增加循环数试试
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sunshine039[使用道具]
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发表于 2011-10-8 11:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
循环数31和35我都试过了，还是老样子
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@木木@[使用道具]
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发表于 2011-10-8 11:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
循环数31和35我都试过了，还是老样子

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40呢？也可以试试啊！估计是模板或引物的问题的可能比较大喔！
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mimili_901[使用道具]
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发表于 2011-10-8 11:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
作过阳性对照吗? 如果阳性对照没问题,就证明体系没问题,最大的可能是引物设计或合成有问题.在我的实验中大概在100对引物中有1对是因为合成的问题而不工作.
建议用做long-PCR的体系试试,两步法,效率比普通PCR要好得多
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