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标题:【求助】为什么不能提取DNA直接进行PCR?

H2O[使用道具]
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1
 

【求助】为什么不能提取DNA直接进行PCR?


我是第一次接触PCR实验,PCR的模板是经逆转录生成的cDNA,请问为什么不能直接提取DNA进行直接进行PCR反应呢?
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yhz1973[使用道具]
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2
 

因为你是做基因的mRNA表达水平的变化,所以一定是要从mRNA的水平出发(DNA和转录后的mRNA是不一样的,DNA含有内含子,mRNA不含有,因为在转录过程中内含子被剪切掉了),但又由于RNA比较不稳定,所以通常都是逆转录成cDNA再做PCR。
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rfv[使用道具]
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很多战友都是“过来人”了,在菜鸟时代也曾有过现在看起来非常低级的失误,也曾有很多疑惑希望有经验的老同志给以指导,将心比心吧,人家虚心问,老同志也稍微注意一下言辞虚心作答,要不然人家的虚心就变成心虚了,兴许人家一直在搞药学研究,偶尔需要做点基因表达的东西,基础自然会薄弱些。
以上纯属灌水,见谅。
以下说说楼主的问题,我也尽量说得简明易懂些,当然表述上可能就不是那么严密了。
楼主要先明白基因,mRNA,cDNA是啥关系。
基因转录得到了mRNA,mRNA逆转录得到了cDNA
你的目的基因在基因组中的拷贝数(很多基因在基因组中只有单独的一条,但也有多条相同基因共同存在于基因组的情况,这个1条或n条的数就是拷贝数了)是一定的,你加药不加药,这个拷贝数都不会变了,所以如果你直接提取基因组DNA,那么无论怎么做PCR,也不会有差异了。
但是cDNA与基因组DNA不同,我们提取mRNA,然后用逆转录酶把mRNA变成cDNA,这样cDNA和mRNA之间就存在着等比的关系,我们用实时定量PCR或者半定量PCR检测cDNA的多少,也就相当于检测mRNA的多少,这样才能比较出你要研究的目的基因的mRNA的表达水平。
希望这些对楼主能有帮助,的确如有些战友所言,如果楼主以后要经常从事分子生物学研究的话,最好还是找机会听些课,看点书籍,多和老同志聊聊,肯定是有裨益的,祝你顺利。
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4
 

呵呵!你没告诉我们你的目的是什么,所以不好说,
如果从基因克隆的角度来说,DNA和cDNA都可以的,但是DNA包含有内含子,片段通常比较长。
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H2O[使用道具]
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我的目的不是基因克隆,是检测药物作用下基因的mRNA表达水平的变化情况。
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c86v[使用道具]
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cDNA是由mRNA逆转而来的,反应的是基因表达量。
你提DNA,是为了干什么?做遗传学研究?
一个基因,一般来说每个人都是有的,肯定都能P出来,除非你是做SNP检测。
你搞不清楚要以哪个为模板,说明你最基本的RNA和DNA代表什么都不知道。
建议先去看生化书,这里不详细解释了。这样对你自己有帮助。
顺便问一下,楼主是本科生还是硕士生?
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loli[使用道具]
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我没有半点取笑楼主的意思
你的前半句是灌水,后半句纯粹是广告,已经在很多贴中看到你的广告了。
如果你真的做SNP,有成果和经验,不妨直接贴出来,视贡献,版主还能给你加点分。我们也会投票给你,如果只是为了广告而发贴,我建议版主K杀之。
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8
 

本人做SNP的 有些成果和经验,需要的朋友联系我 andoneyan6391960@163.com
我没有半点取笑楼主的意思
你的前半句是灌水,后半句纯粹是广告,已经在很多贴中看到你的广告了。
如果你真的做SNP,有成果和经验,不妨直接贴出来,视贡献,版主还能给你加点分。我们也会投票给你,如果只是为了广告而发贴,我建议版主K杀之。
人家就算做广告也没有留什么公司名或者什么价格和你有屁事呀,况且人家留下信息是和别人讨论相关的知识,也不会抢钱的,你管的着吗?没有事管好自己吧
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sunnyB[使用道具]
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很多战友都是“过来人”了,在菜鸟时代也曾有过现在看起来非常低级的失误,也曾有很多疑惑希望有经验的老同志给以指导,将心比心吧,人家虚心问,老同志也稍微注意一下言辞虚心作答,要不然人家的虚心就变成心虚了,兴许人家一直在搞药学研究,偶尔需要做点基因表达的东西,基础自然会薄弱些。
以上纯属灌水,见谅。
以下说说楼主的问题,我也尽量说得简明易懂些,当然表述上可能就不是那么严密了。
楼主要先明白基因,mRNA,cDNA是啥关系。
基因转录得到了mRNA,mRNA逆转录得到了cDNA
你的目的基因在基因组中的拷贝数(很多基因在基因组中只有单独的一条,但也有多条相同基因共同存在于基因组的情况,这个1条或n条的数就是拷贝数了)是一定的,你加药不加药,这个拷贝数都不会变了,所以如果你直接提取基因组DNA,那么无论怎么做PCR,也不会有差异了。
但是cDNA与基因组DNA不同,我们提取mRNA,然后用逆转录酶把mRNA变成cDNA,这样cDNA和mRNA之间就存在着等比的关系,我们用实时定量PCR或者半定量PCR检测cDNA的多少,也就相当于检测mRNA的多少,这样才能比较出你要研究的目的基因的mRNA的表达水平。
希望这些对楼主能有帮助,的确如有些战友所言,如果楼主以后要经常从事分子生物学研究的话,最好还是找机会听些课,看点书籍,多和老同志聊聊,肯定是有裨益的,祝你顺利。
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wawa[使用道具]
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我们都是从不懂走过来的,无论是什么原因,发帖的人有不明白的,我建议:能答就答一句实实在在的答案,别管人家问的问题水平高低。
对于回答问题的人:别说什么看书找答案,如果这么说的话,那什么问题都能去看书找答案了。
对于问问题的人:请先搜索一下过往的帖子或百度一下,尽量自己废点时间也别浪费大家时间,谁让咱是不会的人呢。
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