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标题:[求助]偶提取的DNA含量太低了

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发表于 2011-10-9 09:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]偶提取的DNA含量太低了

[求助]偶提取的DNA含量太低了


我提取细菌的DNA,用的是向生工订购的NDA提取试剂盒，第一次是半个月前提取的，保存在－20度冰箱中。第二次是六月一号提取的，也是保存在－20度冰箱中。

今天拿去测DNA含量非常低。究竟是怎么原因呢？

我自己考虑是提取的时候操作不规范，比如那种加很少量的酶，偶没加进去，或者是提取出来的DNA反复冻融（其实我也没经常冻融啊），请各位高手帮偶分析一下。谢谢！！
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发表于 2011-10-9 09:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可能是你溶DNA的水有问题。一定要使用灭菌的超纯水，质量不过关的水会很容易引起DNA的降解。
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发表于 2011-10-9 09:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用TE溶解的 ，不过最初溶解Proteinase K 和RNase A的双蒸水不知道合不合格。
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发表于 2011-10-9 09:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用TE溶解的 ，不过最初溶解Proteinase K 和RNase A的双蒸水不知道合不合格。
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长发piaopiao[使用道具]
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发表于 2011-10-9 09:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想应该是提取方法的问题。DNA又不是RNA，不会那么容易降解，除非有DNA酶存在。反复冻融也应该不会有那么大的影响，所以我觉得是不是你方法的问题呀。不知道你刚提取完时有没有检测DNA含量。
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发表于 2011-10-9 09:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
刚刚提取出来的时候没测过，都是过了一段时间才测的。

我是用试剂盒提取的
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发表于 2011-10-9 09:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
Vitagene的基因组抽提试剂盒提出的DNA, 不但量少, 而且和酶切后的基因组差不多, 弥散成一片.
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发表于 2011-10-9 09:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
提取过程中，你有否看到絮状的沉淀物啊？如果有的话，一般含量不应该太少。我做过试剂盒的也做过经典酚提抽的，感觉吸弃上清的步骤很需小心，尤其是未见沉淀的，很容易误吸出DNA.
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发表于 2011-10-9 09:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
又提了一次，今天去测了DNA含量，又很低！

昨天提取过程中，将上清500ul转到一个新的1.5ml无菌EP管中的时候，有的会吸上来一点白色的絮状物，后来加入500ul precipitation Solution，充分混合后，好像管子里出现了明显的白色絮状物（但是比之前吸出来的絮状物多），我以为是前面不小心转出来的白色絮状物，用小枪头把它们都挑出来了，这样对实验结果有影响么？

谢谢！
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发表于 2011-10-9 09:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
又提了一次，今天去测了DNA含量，又很低！

昨天提取过程中，将上清500ul转到一个新的1.5ml无菌EP管中的时候，有的会吸上来一点白色的絮状物，后来加入500ul precipitation Solution，充分混合后，好像管子里出现了明显的白色絮状物（但是比之前吸出来的絮状物多），我以为是前面不小心转出来的白色絮状物，用小枪头把它们都挑出来了，这样对实验结果有影响么？

谢谢！
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