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标题:[求助]大家能推荐好一点的DNA提取试剂盒吗？

眼药水~[使用道具]
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发表于 2011-10-9 10:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]大家能推荐好一点的DNA提取试剂盒吗？

[求助]大家能推荐好一点的DNA提取试剂盒吗？


我要提取细菌的DNA，接下来做PCR。

我之前用的是向生工买的进口的BBI试剂盒，提了三次浓度都很低。

我是严格按照说明书来做的。

我现在在分析原因，到底是自己的操作有问题还是试剂盒的问题。

请各位高手也帮我分析一下，谢谢！
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@花开花落@[使用道具]
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发表于 2011-10-9 10:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你可以用一下MBI fermentas 的DNA提取试剂盒，我用了挺不错的。
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发表于 2011-10-9 10:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以用一下promega的质粒纯化试剂合
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发表于 2011-10-9 10:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你可以找广州中山大学达安基因股份有限公司咨询以下，他们是专门做这方面事的，他们的试剂很不错。电话：020—32290172
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菠萝菠萝蜜[使用道具]
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发表于 2011-10-9 10:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用过三博远志的基因组提取试剂盒，觉得效果蛮好的。
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荒漠孤驴[使用道具]
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发表于 2011-10-9 10:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
为什么不自己配试剂做呢？经典的方法这么好，随便抽用来做PCR 都没什么问题的。而且就算抽得不好，也容易找到什么地方出问题，虽然试剂盒方便一点，但要想大量的话还是经典的方法好，而且你操作好的话，抽出来的 DNA 片段大小和 浓度肯定比试剂盒的好。方法分子克隆上有，酚氯仿乙醇沉淀就行了。
还有做PCR一般用基因组DNA 的量为100 ng－1ug 之间（总体积50ul）（要是质粒的话，不用1 ng 就足够了），细菌的基因组小，用量更少，这种浓度用2、3 ul 你抽提的基因组 DNA达不到吗？要是浓度太低，你抽提过程中最后一步溶出液可以少加一点，在离心之前让溶出液（一般也就是 10 mM的 Tris）多停留一会 。要是不行的话，你前面的裂解细胞步骤可能有问题。
QIAGEN 的基因组 DNA 抽提试剂盒挺好的，不过太贵，没必要！
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荒漠孤驴[使用道具]
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发表于 2011-10-9 10:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
为什么不自己配试剂做呢？经典的方法这么好，随便抽用来做PCR 都没什么问题的。而且就算抽得不好，也容易找到什么地方出问题，虽然试剂盒方便一点，但要想大量的话还是经典的方法好，而且你操作好的话，抽出来的 DNA 片段大小和 浓度肯定比试剂盒的好。方法分子克隆上有，酚氯仿乙醇沉淀就行了。
还有做PCR一般用基因组DNA 的量为100 ng－1ug 之间（总体积50ul）（要是质粒的话，不用1 ng 就足够了），细菌的基因组小，用量更少，这种浓度用2、3 ul 你抽提的基因组 DNA达不到吗？要是浓度太低，你抽提过程中最后一步溶出液可以少加一点，在离心之前让溶出液（一般也就是 10 mM的 Tris）多停留一会 。要是不行的话，你前面的裂解细胞步骤可能有问题。
QIAGEN 的基因组 DNA 抽提试剂盒挺好的，不过太贵，没必要！
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二丫头466[使用道具]
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发表于 2011-10-9 10:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我按分子克隆书上的方法，粗提质粒，之后pcr，效果不错。
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发表于 2011-10-9 10:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
生工的试剂盒提细菌DNA效果是不太好，我们用维特洁（V-gene）公司的试剂盒效果不错，可以试试，价钱也不贵。
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胖小妮子[使用道具]
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发表于 2011-10-9 10:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
生工的基因组DNA抽提kit的确不怎么样！！！
我觉得是菌的量太多了的缘故，因为一多就会变得很粘稠，过柱子时就离不下去，还会导致未消化的蛋白连同你的目的DNA一起损失到管底！看看是不是管底有这种情况，如果是就是这种原因。
其实经典的抽屉方法也行的通的，是不是怕抽的不好，模板不纯，从而导致以后PCR的结果啊？其实没有什么的，除非你做杂交或者建库，PCR的话应该没有太大影响！
要是有钱的话，就买Qigen的kit，perfect！！！三博就有代买。  
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