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标题:[求助]我用试剂盒提取的DNA浓度太低了

ffaa[使用道具]
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发表于 2011-10-9 10:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]我用试剂盒提取的DNA浓度太低了

[求助]我用试剂盒提取的DNA浓度太低了


我已经提了三次了，是提取的细菌DNA，接下来做PCR。

请问大家有人有类似的经历么？我现在在找原因，希望大家也给点提示和建议。谢谢！！
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荷塘青蛙！[使用道具]
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发表于 2011-10-9 10:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果你只是做PCR的话其实不需要专门提DNA，只需要将细菌（可加可不加裂解液）在沸水中煮5-10min，12000rpm离心10-15min，再取一些做模板就可以了。也可按分子克隆上的经典方法提细菌的基因组DNA。
而且即使你提的DNA浓度低，用来做PCR的模板应该是没有问题的。你可以在PCR是适当增加一些模板量。
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发表于 2011-10-9 10:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果我做完PCR后还要测序也可以这么提DNA么？
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 小中大
如果我做完PCR后还要测序也可以这么提DNA么？
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 小中大
你可以在接菌时多接些，我一般接40ul/5ml LB,多摇些时间，14h，可以先测一下OD值，最好1.0以上，如果OD值没问题，就换试剂盒试试，TAKARA，维特洁，promega的都可以  
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 小中大
我是让细菌在MH琼脂平板上长18－24小时后，再用接种环挑一些菌，用生理盐水溶解的，每次挑的菌不是很多。
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发表于 2011-10-9 10:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我没有用肉汤培养，可不可以多挑点菌用生理盐水溶解呢？谢谢!
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发表于 2011-10-9 10:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用蒸馏水就可以了
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发表于 2011-10-9 10:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你是说用蒸馏水溶解细菌么？

我是用接种环挑一些细菌溶解在生理盐水中，然后离心，去上清，再用200ulTE溶解，制备模板液。
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大桃子同学[使用道具]
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发表于 2011-10-9 10:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不知这位仁兄采用什么方法提取DNA,但影响DNA提取结果的因素有:
1.离心速度不当,在加入蛋白酶是离心速度太高,而在加入酚试剂时离心速度太低,这些会导致DNA的丢失;
2.DNA在滤过膜时丢失太大,或者是抽取时将部分DNA丢失.
3.加入TE的量太大,可能会使DNA浓度偏低,可以采取冷冻抽干技术加以浓缩.

这种情况刚学习DNA提取中经常发生,不断研究学习这种情况会得到克服.  
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