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化学发光酶免疫法测定地高辛

关键词:粒度标准物质 食品成分检测  食品农药残留检测  环保标准物质
    【实验原理】
    采用竞争结合酶免法，待测地高辛与ALP标记的地高辛竞争性结合抗地高辛抗体，形成的复合物再与磁性微珠包被山羊抗兔二抗抗体结合，利用磁性微珠能被磁场吸引，迅速捕捉被测抗原，协助该复合物快速地与其他非特异性物质分离，经洗涤去掉未结合的ALP．地高辛后，加入ALP的发光底物Lumi—Phos*530，反应后发出的光量子被光电倍增管检测，光量子的强度与标本中的地高辛含量成反比，对照仪器中储存的多点定标曲线即可得知样品中地高辛的含量。
  【试剂与器材】
  1．Unicel DxI 800 ACCESS免疫测定分析仪。
  2．美国BECK COULTER公司生产的地高辛检测试剂盒。
3．样本要求
    (1)样本类型及样本量：空腹静脉血约3ml，用普通无任何添加剂试管(不抗凝)采集标本(于服用地高辛6～8小时后或者在下一次服用地高辛之前采集血样本)。
    (2)样本处理：血液凝固后立即离心，分离血清(2小时内完成)。
    (3)样品储存和稳定性：样品在室温下，密闭保存8小时，若样本8小时内不能完成检测，将样品冷藏于2～8℃，若样本48小时内无法检测或需运输样本，则-20℃保存。
    【操作步骤】
    1．定标
    (1)定标品：美国BECKMAN COULTER公司的地高辛定标液(包括浓度为0µg/L、0．5µg/L、1．0µg/L、2.0µg/L、4.0µg/L和6.0µg/L的S0、S1、S2、S3、S4、S5六瓶定标液)。
    (2)定标频率：每批试剂必须标定一次，每次定标后有效期为28天。
    (3)准备：直接使用。
    (4)储存：2～10℃可稳定到定标品瓶标签上标出的失效期。
    2．样品测定步骤
    (1)主菜单下选择Sample Manager(样本管理器)。
    (2)选择New Request(新请求)F3。
    (3)选择Patient／OC Request(患者／质控请求)F1。
    (4)输入样品架编号、样品编号和检测请求，将被要求的样品放入样品架，并验证输入信息是否正确。
    (5)装载样品架，仪器自动测定项目，计算结果并传输数据。
    【结果计算】
    仪器直接打印出原始浓度结果。
    【参考区间】
    治疗心衰的成人地高辛血清有效浓度为0．8～2．0ng／ml，安全范围极小，当血清浓度超过1．5ng／ml便有部分患者出现毒性反应，而超过2．0ng／ml后，毒性反应的发生率呈指数式急剧增加。治疗心房纤颤及心房扑动有效浓度为2．0ng／ml左右甚至更高
    【临床意义】
    治疗浓度的地高辛可轻度抑制心肌细胞膜上的Na+，K+-ATP酶，胞内的Na+更多地通过Na+→Ca2+交换转运，使胞内Ca2+浓度升高，Ca2+触发的兴奋一收缩偶联增强，产生正性肌力作用，增加心排出量，降低窦性节律，减慢房室传导等作用。用于治疗慢性充血性心衰、心房纤颤及心房扑动等。主要毒性反应为各种心律失常，可因此致死，并可引起中枢神
经系统及消化道症状。其治疗作用及毒性反应均呈血药浓度依赖性。
    【注意事项】
    1．样品中胆红素>10mg／dl(171µmol／L^甘油三酯>1800mg／dl(20．32mmol／L)的脂血标本及血红蛋白>1000mg／dl(10g／L)的溶血样本、白蛋白>3g／dl(30g／L)的样本均不影响地高辛浓度检测。
    2．可能存在样本内嗜异性抗体干扰。
3．由于交叉反应，地高辛检测会受到地高辛代谢物、强心苷和一些合成类固醇药物的影响。MAN COULTER公司生产的地高辛检测试剂盒。
【评价与思考】
  对地高辛高值和低值浓度样品进行方法学评价实验，检测灵敏度可达0．2µg／L仪器的分析检测范围(AMR)为0．2～6．0µg／L；临床报告范围(CRR)为0．2～12.0µg／L