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标题:【求助】酶切产物转化，长满了菌

雪原[使用道具]
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发表于 2016-1-13 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】酶切产物转化，长满了菌

本人用平末端酶酶切完以后，直接用1/10NaAC,2倍体积的乙醇，70%的乙醇处理，最后用洗脱液溶解。我将获得产物取2.5uL转入DH5α中，结果在相应抗性的LB板上长满了菌，我觉得很费解。还请知道的各位不吝赐教，谢谢啦！
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xevin[使用道具]
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发表于 2016-1-13 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
个人觉得是因为你转入了E.coli后，细胞内部的修复机制引起的。
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发表于 2016-1-13 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 xevin 于 2016-1-13 11:27 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
个人觉得是因为你转入了E.coli后，细胞内部的修复机制引起的。

我用胶回收，再转化，板子上只长了几个菌
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bojitu[使用道具]
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发表于 2016-1-13 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
很明显你用的试剂出问题了呗，大多数情况是DH5a有问题哦
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 小中大


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原帖由 bojitu 于 2016-1-13 11:28 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
很明显你用的试剂出问题了呗，大多数情况是DH5a有问题哦

我用同样的酶酶切，然后胶回收，再将酶切产物转入同样的感受态，板子上只长了几个菌，这又是为什么？
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yonger[使用道具]
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发表于 2016-1-13 11:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
No ligation needed? Did you transferred the linear DNA into competent E. coli?
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雪原[使用道具]
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发表于 2016-1-13 11:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 yonger 于 2016-1-13 11:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
No ligation needed? Did you transferred the linear DNA into competent E. coli?

我是将线性载体直接转入感受态细胞的
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bojitu[使用道具]
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发表于 2016-1-13 11:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不然就是没切彻底，不然就是抗性失效
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misswu61[使用道具]
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发表于 2016-1-13 11:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用胶回收，再转化，板子上只长了几个菌
...

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胶回收后浓度应该是有变化的。长出菌落的原因可能有：E.coli细胞通过某种DNA修复机制将线性化质粒环化，毕竟细胞经过了生理期；还有，可能是你没有完全切开，但是你说你用胶回收结果还是有菌落，这个实验应该是排除了这个可能性；另外，就是污染问题，可能发生在你的DH5a上，建议换一种大肠杆菌试一试。以上都是个人见解。
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