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标题:[求助]新手求助：我跑的总RNA图像怎么分析？

qqq111[使用道具]
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发表于 2011-10-10 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]新手求助：我跑的总RNA图像怎么分析？

[求助]新手求助：我跑的总RNA图像怎么分析？


这个图像怎么分析啊！
我知道28S。18S。5S可是不知道是不是，也不确定是哪条！
我这样的总RNA能不能接着往下面做啊
我已经提了6次了。真的不想做了


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2011-10-10 17:07
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qqq111[使用道具]
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发表于 2011-10-10 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还有，我不是用变性电泳跑的，就是将电泳槽啊，什么东西都用3％的过氧化氢泡，再用无RNA酶水冲洗，缓冲液也是用无RNA酶水配的。我之所以不敢往下作，因为我已经做了很多次了，都没有出来目的基因，我想一步一步来找原因！！
高手帮忙！！！！
谢谢！
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qqq111[使用道具]
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发表于 2011-10-10 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
对了，我用的就是普通的琼脂糖凝胶电泳，75伏
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 小中大
还有，请问：18与28的灰度比值是不是1：2，这么就是说28S应该很亮的，
这样的我的图像是不是不合格呢！？？
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发表于 2011-10-10 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还有，请问：18与28的灰度比值是不是1：2，这么就是说28S应该很亮的，
这样的我的图像是不是不合格呢！？？
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发表于 2011-10-10 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我觉的你的RNA还可以，从图上到下依次是5S、18S、28S，只要三条条带都比较清楚没有严重的拖尾，说明你的RNA应该没有多大降解，做RT-PCR肯定是没问题的，不过你还是有必要要测一下浓度和OD260/280的值，一般要求在1.8以上。
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发表于 2011-10-10 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你做一下变性凝胶电泳，可能会比较好
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 小中大
我觉的你的RNA还可以，从图上到下依次是5S、18S、28S，只要三条条带都比较清楚没有严重的拖尾，说明你的RNA应该没有多大降解，做RT-PCR肯定是没问题的，不过你还是有必要要测一下浓度和OD260/280的值，一般要求在1.8以上。

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兄弟，可是我一个也是刚开始做PCR的同学说我的条带不行啊，说要28的条带的灰度基本是18的两倍，5S的应该要很少或者是看不见才行。不知道这种说法对不对啊！
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qqq111[使用道具]
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发表于 2011-10-10 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你做一下变性凝胶电泳，可能会比较好

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你好，不过我们这里要做变性的话得再重新购买试剂，我做RNA 的电泳的目的其实就是看RNA提得怎么样，我也不是要求它能好看一点，我想请教的是，我的电泳的样子出来了，高手能不能说明确一点，我提的RNA 是没有问题的！
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 小中大
这个图像怎么分析啊！
我知道28S。18S。5S可是不知道是不是，也不确定是哪条！
我这样的总RNA能不能接着往下面做啊
我已经提了6次了。真的不想做了1

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您提地挺好的，做RT-PCR应该没有问题，您可以用别人的RT产物试试您的引物，看是否有问题，或者用您的RT产物做别人已经成功的PCR。
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