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标题:[求助]聚丙酰氨凝胶电泳中的怪现象

西子[使用道具]
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[求助]聚丙酰氨凝胶电泳中的怪现象

[求助]聚丙酰氨凝胶电泳中的怪现象


聚丙酰氨凝胶电泳:6%的胶,电压100V(美国百乐的电源), 时间80min
从左边数,第1、3、5孔分别为0.6kb、1.7kb、3kb的PCR产物,第2、4、6孔分别为靠其左边孔PCR产物的酶切产物,最右孔为Marker.
请问:
1.为什么加样孔里有亮带,而同样的东西做琼脂糖电泳却在加样孔没有亮带?
2.为什么酶切产物条带两边严重拖尾,从而呈凹形?
3.为什么最左和最右孔条带很斜且一边拖尾?


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98776langtao[使用道具]
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做的胶浓度可能不匀使你的带不正齐,你为什不用琼脂糖 凝胶跑呢  
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98776langtao[使用道具]
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做的胶浓度可能不匀使你的带不正齐,你为什不用琼脂糖 凝胶跑呢  
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二丫头466[使用道具]
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胶没搅匀,凝胶时间太短。我做PAGE胶,一般凝一小时以上。
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西子[使用道具]
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因为琼脂糖电泳不能把我的条带分开,必须用聚丙酰氨

我是凝了一小时以上啊!  
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发表一些意见 参考一下
1.为什么加样孔里有亮带,而同样的东西做琼脂糖电泳却在加样孔没有亮带?
一般琼脂糖凝胶孔径比较大,不容易有塞住的情况。
而聚丙酰氨凝胶电泳孔径比较小,当样品有聚集或分散不均时,比较有上述之情形发生。

2.为什么酶切产物条带两边严重拖尾,从而呈凹形?
师兄的经验告诉我,一般这种情况多是样品加太多,加上胶凝集状况不好所引起的。因本身没有遇过,你可以稀释并且注意凝胶再做一次吧!

3.为什么最左和最右孔条带很斜且一边拖尾?
如同楼上所言,胶没搅匀,凝胶时间太短,加上我所认为的一点,在胶体凝结的过程中,是否有碰撞?使胶体下半部分凝结呈现浓度不均的状态?因为6%胶体,凝结的过程本身就不是很好凝,一般我们都放置一个小时以上。(纯属猜测)
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边上多余的孔道加上电泳液了吗? 没加的话最边上的两道会斜掉
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快乐的大脚[使用道具]
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是在胶体凝结的过程中,没有碰撞

电泳液足够
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WHO?[使用道具]
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预电泳20-30分钟,电泳缓冲液和胶的缓冲液的离子浓度不一致,电泳时会产生缓冲液前沿,影响条带的形状。
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果冻也酸[使用道具]
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我估计是你电泳仪问题,不知你跑蛋白如何?
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