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标题:[求助]请问有谁用过生工自产的trizol？好用吗？

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发表于 2011-10-11 11:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]请问有谁用过生工自产的trizol？好用吗？

[求助]请问有谁用过生工自产的trizol？好用吗？


请问有谁用过生工自产的trizol？好用吗？
我觉得它的说明书就只有一张小小的卡片，而且上面将组织RNA的抽提步骤讲的太简，我实在不放心用。
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发表于 2011-10-11 11:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还有，用异丙醇沉淀和无水乙醇沉淀有什么区别吗？我见有同学用无水乙醇（他用的是invitrogen的）  
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发表于 2011-10-11 11:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们用的就是生工的柱式试剂盒，从组织提RNA，用它直接来匀浆效果不好，我们自己配置了变性液来匀浆，然后吸出匀浆液适量加入TRIZOL进一步变性，75%乙醇沉淀即可，无水乙醇也可，但考虑到用DEPC水配置乙醇更好，所以我们用75%乙醇DEPC水配。另外我们提的RNA一直有DNA污染，不知道是试剂盒的原因还是我们自己配液的问题，不敢给你肯定答复。
关于沉淀，你看一下其他方法（比如一步法试剂盒）对比一下就可知道，异丙醇是沉淀RNA，乙醇沉淀DNA，如果你用TRIZOL，乙醇沉淀时见有白色沉淀，那是DNA，我们用此沉淀跑过电泳，是一条很亮的DNA带。
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发表于 2011-10-11 11:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用的trizol不是柱式的，（货号sk1312），价格比我的同学买的要便宜2/3，而且操作步骤还很省时间（按说明书上），加氯仿后无需静置，每步的离心时间只要5min；我正在模索看到底好不好用，如果好用倒可以推荐给大家了。不好用的话，我大概只有重新买了。
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发表于 2011-10-11 11:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我刚刚用过一次,100mg组织用了1mlTRIzol,得到total RNA经定量有大约200ug,ratio1.67,而且做了RT,beta-actin内参PCR没有问题
感觉还可以
生工的TRIzol是无色的,Invitrogen的带有指示剂是粉红色的
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发表于 2011-10-11 11:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们一直用的是生工的TRIZOL，效果一直都还可以。唯一的是生工的业务员实在是太面了，让人的信任度大减！！！  
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发表于 2011-10-11 11:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们一直用的是生工的TRIZOL，效果一直都还可以。唯一的是生工的业务员实在是太面了，让人的信任度大减！！！  
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发表于 2011-10-11 11:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
上海申工的TRIZOL我这里有一个学生用过，感觉不太好。使用方法和同济医学院编的研究生实验指南上基本一致，估计其配方可能就是酸性酚加上异硫氰酸胍的混合液，不过效果似乎还可以。
我们实验室一般都是用进口的，国际标准，比较可靠。其实大可不必用说明书上推荐的量，单纯做RT需要的
量很少，可以用0.5ml或更少的TRIZOL，当然，组织也要相应地减少。
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发表于 2011-10-11 11:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不好意思，再请教各位高手一个问题：
你是如何知道你提的RNA内混有DNA的，你打算如何去除这些DNA呢？不去除肯定会影响下一步的RT-PCR，导致将基因组片断PCR出来就失去RT的原意了，如果用不含rna酶的dna酶处理，也怕残留的dna酶会影响PCR；如果采用进一步提纯的方法，不知该怎样操作？
我觉得我提的RNA好像也混有DNA，但我不能肯定，因为我不知道怎样确定。只是我的RNA电泳有三条带，相当于5s那条明显较后面两条要宽。我不能肯定这是降解还是混有DNA


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发表于 2011-10-11 11:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
生工的TRIZOL不好用，总是有些降解，而且混的DNA也很多。如果三条带有拖尾那肯定是部分降解了。
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