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标题:[求助]克隆表达和检测表达的引物设计

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发表于 2011-10-11 14:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]克隆表达和检测表达的引物设计

[求助]克隆表达和检测表达的引物设计


请教大侠，是不是克隆表达的引物设计前后要加上酶切序列，而用来检测表达的引物不用加?
thank you
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发表于 2011-10-11 14:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
加酶切是根据你的需要，克隆、表达引物都可以加或是不加，要具体条件而定。做克隆时，你可以自己加酶切序列或是用载体上 的序列。关键是你要加的酶切位点在你目的序列上没有相同的序列。
检测表达不表达的话原核用诱导表达，后page电泳，后用western验证，真核做单克隆筛选，后用western验证。当然其它验证的方法也比较多。
如果是检测装没装上的话，用酶切，情况同上。
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发表于 2011-10-11 14:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我问的TGF－β1 ，TGF－β2 receptor引物是用来做检测的，通过RT-PCR来检测是否有表达，本来想照你说得查到序列自己试着设计一下，可是不知道哪里可以查到他们的序列，能告诉我怎么查吗？（老板突然交给我的任务，明天就要结果，急死了！）
谢了！
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发表于 2011-10-11 14:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
NCBI,nucleotide,输入TGF－β1 /TGF－β2 receptor ，点limit，限制标题、序列类型。找mRNA或cDNA序列。
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发表于 2011-10-11 14:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
NCBI,nucleotide,输入TGF－β1 /TGF－β2 receptor ，点limit，限制标题、序列类型。找mRNA或cDNA序列。
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发表于 2011-10-11 14:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
NM-009370 和NM-009371
下面是我设计的引物，帮我看一下，谢谢
NM-009370
upper primer
5'-3' atg gag gcg gcg gcc gct gct cca
lower primer
5'-3' tta cat ttt gat gcc ttc ctg

NM-009371
upper primer
5'-3' atg ggt cgg ggg ctg ctt cgg ggc
lower primer
5'-3' cta ttt ggt agt gtt cag cga

斑竹大人，能否百忙之中尽量抽出时间，谢谢！
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98776langtao[使用道具]
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发表于 2011-10-11 14:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
能否把模板发给我？
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发表于 2011-10-11 14:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
NM_009370 5735 bp mRNA linear ROD 20-DEC-2003
Mus musculus transforming growth factor, beta receptor I (Tgfbr1), mRNA.
CDS 8..1519
1 cgggaccatg gaggcggcgg ccgctgctcc acgtcgtccg cagctcctca tcgtgttggt
61 ggcggcggcg acgctgctcc cgggggcgaa ggcattacag tgtttctgcc acctctgtac
121 aaaggataat tttacctgtg agacagatgg tctttgcttt gtctcagtca ctgagaccac
181 agacaaagtt atacacaata gtatgtgtat agctgaaatt gacctaattc ctcgagacag
241 gccatttgta tgtgcaccat cttcaaaaac aggggcagtt actacaacat attgctgcaa
301 tcaggaccac tgcaataaaa tagaactccc aactacagga cctttttcag aaaagcagtc
361 agctggcctt ggtcctgtgg agctggcagc tgtcattgct ggtccagtct gcttcgtctg
421 cattgcactt atgctgatgg tctatatctg ccataaccgc actgtcattc accaccgtgt
481 gccaaatgaa gaggatccat cactagatcg ccctttcatt tcagagggca ccaccttaaa
541 agatttaatt tatgatatga caacatcagg gtctggatca ggtttaccac tgcttgttca
601 aagaacaatt gccaggacca ttgtgttaca agaaagcatt ggcaaaggtc ggtttggaga
661 agtttggcga ggcaaatggc ggggagaaga agttgctgtg aagatattct cttctagaga
721 agagcgttca tggttccgag aggcagagat ttatcagact gtaatgttac gccatgaaaa
781 tatcctggga tttatagcag cagacaacaa agacaatggg acatggacgc agctgtggtt
841 ggtgtcagat tatcatgagc atggatccct tttcgattac ttgaatagat acactgttac
901 tgtggaagga atgatcaagc ttgctctgtc cacagcaagt ggtcttgccc atcttcacat
961 ggagattgtt ggtacccaag gaaaaccagc tattgcccat agagatttga aatcaaagaa
1021 tatcttggtg aagaaaaatg gaacctgttg tattgcagac ttgggacttg ctgtgagaca
1081 tgattctgcc acagatacaa ttgatattgc tccaaaccac agagtaggca ctaaaaggta
1141 catggcccct gaagttctag atgattccat aaatatgaaa cattttgaat ccttcaaacg
1201 cgctgacatc tatgcaatgg gcttagtgtt ctgggaaatt gctcgacgct gttctattgg
1261 tggaatccat gaagactatc agttgcctta ttatgatctt gtaccttctg atccatcggt
1321 tgaagaaatg agaaaagtag tttgcgaaca gaagttaagg ccaaatattc caaacagatg
1381 gcagagctgt gaggccttga gagtgatggc taaaattatg agagaatgct ggtatgccaa
1441 tggagcagca aggctgacag ctttgcgaat taaaaaaaca ttgtcacaac tcagccaaca
1501 ggaaggcatc aaaatgtaac tgaaacaccg tgggaactct gctctcttca tatctgctcc
1561 tgggtgttta ggaggctggt tgttctacct cactgagaga acagagggct ctgcttcctc
1621 ttgcagcagt ggaatatggt caactgaaag cttcccaggg tttctctggg cccagaggca
1681 gccgtggggt cctttctgtg cactatggat acttcttcca gacagttaca gaatgttgtg
1741 tagtctactt ttgtttttat taacaaagct tgtttttaaa gacaactgcc agcccttagg
1801 gagctgctgt gctgttgacc ttctgtaagg gtgaaggagc tggggtgtgg cactaaatga
1861 agcacttctg attttcactc ctagtagtac attctcagag gactctgaac cactagtgtt
1921 tccttggttc actttgaatg tactgttcta taatttttca agatcttaaa ctaacacttt
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 小中大
1981 aaactctata gtctaaaaaa tatgacctcg tggaggcgtg ggggcacagt tgctccgttg
2041 tatttgtgca cagctccttc acactctgaa cacaacacac cttcacagta gggttgtgct
2101 acaccagtaa gtgctacttt tgcatctgtc taagtggaaa cgaacagaac tacttaaagg
2161 cggtgttaag tcctgtatca ttttcattca aaaagtttat ttttctgagt aacctaaacc
2221 ttttctgggt ttgtttttgt tttttgaggg tttttgtgat agatgtcatt cagtcttcat
2281 gcctttctcc tacccagatg tgcttgaacc actgaggcaa ggctgtagca ttgataagca
2341 gtgactgcca tgcgggaaca ccccacagga gcactggagc tctgcagttg agacgtttag
2401 cctgagttta ttttaagaag tgaagtggca ctccaaacat gtacagtgct ttatggatgt
2461 aatcattatg gtatacagac tccttttgaa aggggaggct tgtctattgc cgaaggaaaa
2521 gttgtatgct gttctgtaag ccatttcttt ttctttattt gatcaaagca gtgttttgtt
2581 ttgttttgat ttttcttttt tggaaaggaa ttgcatttaa aattcaaatg tggttaatgt
2641 taaataatag gcctttttct aggaaggcag atatagttaa tatgaatgta caagtgtagg
2701 tgactttcac atgttatgta gctgtaagta tttgtggatt ctatcttggg aagggtagag
2761 ttagtggagt tttgaggtct cactaccctt tgaggaaggc agcttttaat tcagtctttt
2821 tatctcatat gtgcagatct tgcaactgct tgatttacat ggtagcaatg aattcagtgc
2881 cacgttgata ctaggagaag cagcaactaa tagctattct gagtagaggc tctcttcata
2941 tattcttggt catattaaat gtcaaagtca gtccgttggg tcttctcact gctgctggag
3001 ttaggtggtt gagcctgggt tttacttcag tgctgtcaaa tctttgcagg gcttgtgtgg
3061 ctttcaaagt cctttttatc actgtgatca tattctgggc ggggaaatgt tatcatcatt
3121 gcttgagacg agatgttgaa catagtgata ccaatcccca gataaaaagg tcaaaataac
3181 ctttagtgtt tagccaagaa gagattgtga ctattgatct gaagcagctg ggctctgtta
3241 atgtcttatt tcaaacctag catacatttg aagactattt ggtcttaaac caaagtaact
3301 gtaggacgaa tgacatacta cctagacatt agtgtccgtt tcatacgtca gaaacaccat
3361 gggaaaaagt acctagagat tagtatcttt aatacaaatc tgagtttttt ctgtaattat
3421 catgatttca tcaatgtaag taagggtttg ttgttacagt tgtatcacct gcttaaataa
3481 gctcttgtgc tataatcagg tacttttggg gcctttgttt tcagtttttt ccatttctaa
3541 cccttcgaga tctgctttat agaaatccag ggaccaatgt attttatcac taaaactgtt
3601 tttatataat tttaagacca taccaaaagt tatctgagtt aaagttgtaa tacgtttctt
3661 actttcttgc aaggaaatgg gtttttactg aagacacttc tcatgatatc tgaagttgaa
3721 gaatcattat gtttttctta cctaagtgga taaaatgtgc tttgatgaat cagggaattt
3781 tttaaagttc gaatttagtt ctaaattgag tttacatgtt tacagctaat tttttgtgta
3841 gggatagttt gattctctag gtggccaata ctgaatataa aaataactta aaaattgaga
3901 taggtcatgg ttaatgtggc tataactata tatacatcta attagagaaa tatttctatg
3961 taattttgta gtgcagtctg ttgtttctat tgccaatcaa agacttcccc ccagccccaa
4021 agtgtagtat ggctaagaca tatcttctga caaattacat attatcttgt caataccctg
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发表于 2011-10-11 14:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
4081 gttaagctag catgaaggaa gtatgactta ctgaggctta cacaacttga gtcccttata
4141 tcttcagctc tgtttttccc actctgcctt tctgctgccc cctggctcag agacttagtg
4201 ttcctgaccc cacctccagc ctttggacct aagagctgct tttgagacct aaaatgaagt
4261 gattgatgga agctgtgtga catttttcca cttccttgag tcactgggtg ttatgaggga
4321 gtgatctgca aattggggta gggggtgccc ctactggtag ccctgctttg atgtcagctc
4381 tgggcaaaga ttagggtgac agctaagtgg cagtggaagt tggcctcaga agtagtggcc
4441 agctgtgtct ctagtaggac agtaaaggca tgaagctcag cctgtaatcc tgctactaca
4501 gtagtactcc agaagtgcct tgaggccctg tgtggggctg tggccatcaa gaattccaga
4561 ttttggttct cgctgcagac ttaagtggcc atgtagccat ttttgtaatc catacatgtt
4621 tgactcttcc ctctgcaaat tgtcagatac gtaaaaccaa tgacaaacta ctacttaaca
4681 tgcacaccaa aatctgccca gaagacattg tgatttcatt ccatgcactg aaggaatgat
4741 tgtaaatcat ttctttgttc cttggtcatg ggagtgttct ggttctacat tgtggagatt
4801 ccagctgttg ttctgttata gcccagcaga acaagtcgac gtgttgaaat tctgaagaat
4861 agtttgggag tgcagtacag cttcatgtgt tggatgttga aactttcatg ggccctcttt
4921 agaaaagcag aggactgtca gcacattatt tttaatcctg ttatgcactc gtacttattg
4981 tcagtaacaa taagtacgag tattgaaaat attgtcagta acattcagtc tctttcttaa
5041 agtgaatttg cttatttttc aatgagattt gtgagtttaa tattatgaac tgtgttttga
5101 taatcccttt ttcacattgt gccaatggaa tggaatattt gatatttctt tatatgtcaa
5161 ggagatgctt caatatgtca tttgctttaa acttaaatta cctctcaaga gaccaaggta
5221 catttacctc attgtgtata taatgtttaa tatttgtcag catccaccag gtttgcaatt
5281 ttatttctat aaagtgtgag tgttacgttg ctaagttact cagatggtac tgtattgttt
5341 atatctgtac cccaaatgac atcatctaga ctttgttttc tgtgtcttat tgtatttgtg
5401 cagtccttta accctgttgg tgtgattgct gccctttcag atatgtgcag gtgtctatag
5461 aaattctcat ttaaggtgaa tggttttgag aaacctgtga agagagaagc ataaactgca
5521 tttccccatc agttttttaa atgtacattg tatgtgtagt aatattccag atgaattgta
5581 aataaaagct agggagatgc ttaaatttca tcctaacact acagtagaaa atggaagcaa
5641 tgcaaataaa caactttttc ccaccaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa
5701 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaa

NM_009371 4702 bp mRNA linear ROD 22-DEC-2003
Mus musculus transforming growth factor, beta receptor II (Tgfbr2), transcript variant 1, mRNA.
CDS 253..2031
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