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标题:[求助]我的PCR产物需要拿去测序，有什么需要注意的么？

mimili_901[使用道具]
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发表于 2011-10-12 12:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]我的PCR产物需要拿去测序，有什么需要注意的么？

[求助]我的PCR产物需要拿去测序，有什么需要注意的么？


我的PCR是检测基因突变的，PCR产物需要拿去测序，我在做PCR的过程中有什么需要注意的么？或者说如果拿去测序我得怎么准备呢？

谢谢！  
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+田田+[使用道具]
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发表于 2011-10-12 12:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
没有什么特别注意的。只要条带特异就行。
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mimili_901[使用道具]
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发表于 2011-10-12 12:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
恩 谢谢！

我还想问，PCR产物测序是不是只需要把PCR产物送一些过去就可以了？一般要多大量呢？
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applebook=213[使用道具]
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发表于 2011-10-12 12:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
PCR产物测序之前最好用柱子或凝胶纯化一下，几十微升可以了，但是产物浓度不能太底，另外你所用的扩增引物必须和你的PCR产物一起送过去。
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mimili_901[使用道具]
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发表于 2011-10-12 12:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
另外我还想问，PCR产物的纯化是不是要买专门的试剂盒呢？

再就是到底需要几十微升呢？因为我常做50ul体系，然后还要取出一点来跑电泳。如果需要50ulPCR产物，那么我就得做100ul体系了哦。
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发表于 2011-10-12 12:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有PCR纯化试剂盒卖,两百元左右. 具体需要多少微升,你可以和测序公司联系,我觉得30微升够了. 另外,你想保存你的目的DNA便于以后用的话,可以连到T载体中去.测序时也不需要要给你的特异引物了.
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发表于 2011-10-12 12:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
50ul应该够了吧, 取3ul左右跑个电泳,条带要亮, 公司要你的pcr产物是用作测序的模板,需经过PAGE纯化的
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发表于 2011-10-12 12:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我好像记得上海生工公司测序不用纯化好的，公司会帮你纯化，符合要求的PCR产物量即可，你可以打电话问问
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发表于 2011-10-12 12:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
PCR产物测序10微生足够了，但是你还要给公司你的特异性引物，最重要的一点是一定要低温运输，现在的气温很高，DNA很容易降解。
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嘉年华[使用道具]
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发表于 2011-10-12 12:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1KB的产物测序需要50-80ng就够了，根据片段大小成反比减少。
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