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标题:[求助]从小体系PCR到大体系PCR

金丝猴[使用道具]
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发表于 2011-10-12 12:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]从小体系PCR到大体系PCR

[求助]从小体系PCR到大体系PCR


我的PCR，一直都用的50ul体系做的，但是我的PCR产物需要拿去测序，别人告诉我需要将50ulPCR产物送到生物公司去，所以我可能需要做100ul体系。

如果我用50ul体系可以扩增出来，那么如果我用100ul体系做，是不是只需要将每种成分都增加一倍即可呢？其他条件都不要改变么？（比如循环条件）
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猫屎一号[使用道具]
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发表于 2011-10-12 12:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不是这么简单的扩大。你最好还是做两管50ul，P完后再合并。免得再去摸索条件。
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克隆鱼[使用道具]
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发表于 2011-10-12 12:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果我用50ul体系可以扩增出来，那么如果我用100ul体系做，是不是只需要将每种成分都增加一倍即可呢？其他条件都不要改变么？（比如循环条件）

——————————————————————————————————————
其实就那么简单：只需要将每种成分都增加一倍即可，其他条件都不要改变！
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koook5695[使用道具]
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发表于 2011-10-12 12:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
测序单向需要两ul，双向4ul，要那么多干吗
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金丝猴[使用道具]
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发表于 2011-10-12 12:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢大家。

有人告诉我是要准备50ul，我也觉得太多了。

ghostfoxlady ，你哪家公司测序的呢？只要这么少一点？

再就是我想问问ssmu29，真的每个成分都加倍就可以了么？
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发表于 2011-10-12 12:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
真的每个成分都加倍就可以了么？

＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝

其实就那么简单：只需要将每种成分都增加一倍即可，其他条件都不要改变！

从10ul到200ul，只要简单按比例就可以，不要想的复杂！！
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金丝猴[使用道具]
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发表于 2011-10-12 12:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
之前也有人跟你的看法一样，只需要将每种成分都增加一倍即可，其他条件都不要改变！

但是我现在用50ul体系，一会出来一会不出来。我曾经试过用25ul体系，也不出来。所以就搞糊涂了。
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发表于 2011-10-12 12:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
没错只需要将每种成分都增加一倍即可，但是PCR循环条件可能需要变，因为存在加热速度的问题。其实最后一步100ul吸出一半加到另外一孔最省事。
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KGZ564[使用道具]
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发表于 2011-10-12 12:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
没错只需要将每种成分都增加一倍即可，但是PCR循环条件可能需要变，因为存在加热速度的问题。其实最后一步100ul吸出一半加到另外一孔最省事。
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飞天小鹿[使用道具]
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发表于 2011-10-12 12:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
决不能简单的2倍，好些条件是要从新摸索，麻烦！！！还是多做两管  
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