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标题:[求助]Taq酶能耐受95度多长时间?

TAT[使用道具]
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发表于 2011-10-12 16:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]Taq酶能耐受95度多长时间?

[求助]Taq酶能耐受95度多长时间?


我的PCR反应体系中加入了UNG酶,需要在95度灭活
但是Taq酶似乎在95度也会被灭活,不知大家有没有
也用UNG酶的,你们的反应体系是怎样的?灭活UNG酶
用的是怎样的条件?
谢谢
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发表于 2011-10-12 16:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
UNG酶我没用过，
不过一般taq酶的半衰期是30min，所以一般的循环次数都设定在30次左右，多了，taq酶会失活。
不过看你的情况，很难了。你可能需要更耐热一些的酶。
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发表于 2011-10-12 16:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
taq酶的半衰期是30min？不会吧  
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发表于 2011-10-12 16:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
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发表于 2011-10-12 16:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也记得taq酶的半衰期是30min。你的方法我不知道（为什么有UNG酶？该酶有何用？），但你是不是可在95度灭活UNG酶之后再加taq酶？就像做pcr预变性时先94度20min然后再加上taq一样。
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+田田+[使用道具]
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发表于 2011-10-12 16:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
UNG酶的作用是降解尿嘧啶与脱氧核糖核酸之间的化学键。加入这种酶的作用是防止PCR产物的污染。
Taq酶在95度半衰期为30分钟，是什么概念？是整个PCR过程中所有95度的时间总和么？
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发表于 2011-10-12 16:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
说得好，我刚开始也想这样，但这样会比较麻烦，我摸这个体系的目的是给别人用，所以越简单越好
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发表于 2011-10-12 16:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
Taq酶在95度半衰期为30分钟，是什么概念？是整个PCR过程中所有95度的时间总和么？

是95度的累计时间，在PCR反映中，变性温度通常是94-95度变性30-60秒，按30个循环来计算，热变性的累计时间为15-30分钟。所以TAQ完全可以保证PCR整个过程的需要，大大简化了操作步骤。
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TAT[使用道具]
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发表于 2011-10-12 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那么，rTaq 和 LATaq 的热稳定性有没有差别呢？两者的活性差别在什么地方呢？用rTaq 可以完成的PCR,用 LATaq 去做会有什么不同么？
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发表于 2011-10-12 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
大家都知道tag酶是在一种高温嗜热菌中发现的，当时发现它的泉水的温度超过100度，我猜测在95度中不会失活吧。
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