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标题:[求助]我提的RNA怎么这么少 ？

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发表于 2011-10-13 11:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]我提的RNA怎么这么少 ？

[求助]我提的RNA怎么这么少 ？


1000000个单核细胞用TRIZOL 提RNA怎么只有0.3ug的RNA?
哪位大侠有何高招,请赐教
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冰激凌小姐[使用道具]
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发表于 2011-10-13 11:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你在沉淀时加入tRna共沉淀试试
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阿拉蕾[使用道具]
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发表于 2011-10-13 11:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
提几条建议：
1。换GIBCO的TRIZOL试试
2。已丙醇沉淀是否充分？
3。跑电泳看一下RNA是否降解？
4。你的测量是否正确？是否稀释倍数太大，打不到仪器的灵敏度？建议你测量时多加的RNA样品。
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阿凡提[使用道具]
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发表于 2011-10-13 11:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
刚开始就是浓度太低测出负值，我把我提的所有RNA放进去才测出来，太少了。然后比值2.3怎么回事？  
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阿凡提[使用道具]
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发表于 2011-10-13 11:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
刚开始就是浓度太低测出负值，我把我提的所有RNA放进去才测出来，太少了。然后比值2.3怎么回事？  
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发表于 2011-10-13 11:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可能原因：
1。260/280比值大于2可能是RNA降解造成的。提取RNA最好先跑个电泳观察一下是否降解。
2。还是量太少测的不准确。
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阿凡提[使用道具]
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发表于 2011-10-13 11:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那会不会TRIZOL太多？
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阿凡提[使用道具]
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发表于 2011-10-13 11:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那会不会TRIZOL太多？
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发表于 2011-10-13 11:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
TRAZOL太多？你说提RNA时的用量吗？一般10*6-10*7细胞加1ml。还是说包装大？一般GIBCO的TRIZOL包装为100ml,你可以合买或者买50ml包装的。  
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969[使用道具]
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发表于 2011-10-13 11:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
TRIzol 太多一般不会影响你的蛋白总量，稍微多一点对你提RNA有帮助，提RNA时一定要快，特别是在没有加入TRIzol之前，而且整个过程要在不通风和冷的环境中进行，RNA很容易降解，提完之后马上检样，确定没有降解之后，再进行以后的实验！
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