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呵呵,你这个问题我以前遇到过,把一些经验贴上,可能不一定适合你,仅仅供参考
0.优先使用温度梯度,不过我觉得你已经做了3个月了,这个方法也一定适过了,呵呵,所以标为 0
1.如果杂带多,一个非常好的方法是TOUCHDOWN PCR,这种方法非常适合杂带多的PCR,主要步骤(比如你的退火温度为 56度)为你退火的温度设置为68度,每度降低0.5度,16个循环后到60度,再用56度扩增20个循环;
2.增加添加剂可能有所帮助,我们很多成功PCR都是这样加添加溶剂做出来的.你可以做平行样,分别添加1)8%DMSO 2)4%甲酰胺 3)5%甘油,其中加前2者效果尤其明显,最后选择最适合的方法.
3.把方法1和2结合起来.
4.引物设计,是不是能换一个更好的引物?你可以把你的引物和序列发上来给你分析一下
5.bty,你的体系没有什么问题的
