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标题:【求助】引物TM值是TM(1M Na+)还是TM(0.05M Na+)啊？

bongte[使用道具]
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发表于 2016-2-9 21:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】引物TM值是TM(1M Na+)还是TM(0.05M Na+)啊？

请问各位大虾PCR时TM是看TM(1M Na+)还是TM(0.05M Na+)?P时是不是将其降5－8度？目的基因P不出来只有二聚体出来，是不是引物没设计的好的原因？我该怎么办啊？
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wanglaoshi[使用道具]
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发表于 2016-2-9 21:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也发现这个问题,引物合成单上就是出现这么个玩意,我也不懂.
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finger[使用道具]
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发表于 2016-2-9 21:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
大家仔细看看引物的单子吧
是根据如下的公式计算的Tm值：
Tm（在1M盐浓度）=81.5+41[GC的百分含量]-[675/引物长度]
Tm（在0.05盐浓度（PCR））=59.94+1[GC的百分含量]-[675/引物长度]
以上是大于10个碱基对的引物的计算公式
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sunshine039[使用道具]
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 小中大

Tm（在1M盐浓度）=81.5+41[GC的百分含量]-[675/引物长度]
Tm（在0.05盐浓度（PCR））=59.94+1[GC的百分含量]-[675/引物长度]
??
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vcve[使用道具]
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 小中大

上下游引物的Tm值（melting temperature）是寡核苷酸的解链温度，即在一定盐浓度条件下，50%寡核苷酸双链解链的温度
引物单上规定一个高盐浓度的Tm值和一个低盐浓度的Tm值，是公司让我们在摸索自己的体系的Tm值时有一个大概的范围吧。
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ladyhuahua[使用道具]
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 小中大

楼上的意思是合适的pcr之TM值应该是介于0.05M和1M盐离子浓度所对应TM值之间咯？
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黄花菜[使用道具]
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 小中大

那如果两条引物的Tm值不同，而且相差10左右，那退火温度应该按什么来算阿？
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remonte[使用道具]
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发表于 2016-2-9 21:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的引物在杰瑞合成的，他们的工程师说退火温度按照低的那个计算的
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西子[使用道具]
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发表于 2016-2-9 21:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

上海生工的DNA合成报告单上也是标着Tm(1M Na+): 74.18 和 Tm: 61.98。我们实验室总是按Tm(61.98) - 5设置退火温度，结果总是不错！现在大家把问题提出来了，才想知道Tm(1M Na）和 Tm 各代表什么？
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newway[使用道具]
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发表于 2016-2-9 21:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
两个Tm 说明什么??
郁闷!
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