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标题:【求助】SNP方法到底哪种最可靠?

langlang[使用道具]
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【求助】SNP方法到底哪种最可靠?

本人最近用ABI的探针做SNP,与酶切法结果比较,居然有差异!酶切结果是野生纯合子和突变纯合子在探针法上都成了杂合子,真伤脑筋。酶切法应该也是公认方法,许多高分文献都应用的,从理论上看,ABI的探针做SNP应该也没问题,结果为什么会有差异,是不是需要再来测序啊,这个工作量也太大了,本来样本量就大。有什么办法解决吗?高手们
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prettygirl@[使用道具]
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2
 
1、 SNP检测的金标准是测序,这个是没问题的,同时还可以发现很多新的SNP位点。
2、其次是SNPshot的方法,这个方法的平台也是测序仪,使用片段分析微测序的原理,对引物的设计有一定的要求。
3、再次是TaqMan探针的方法,检测结果的准确度和测序方法吻合度很好,适用于大样本量检测。
4、质谱法也还可以。
5、杂交芯片法准确度稍差。
6、HRM也可以做SNP,准确度一般,而且对仪器要求高。
以上几种方法除测序法外,都不能做到100%精确度检测。
PS:TaqMan探针检测所提供的数据包含扩增曲线,曲线指数增长期可以显示不同的扩增效率,可以辅助我们进行分型。上面shicongcong同学提供的图片应该是线性图谱,如果更换成youken同学发的那种对数图谱会更明显的看出不同的扩增效率。
毕竟对于困难位点各种检测方法都有局限性,这是我做SNP的经验,希望能够帮助大家。
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viviwang1987[使用道具]
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我用的是加MGB 的探针,可是纯合子也跑出来了两条带,但勉强可以区分,是不是表示探针特异性设计有问题,请大虾们帮忙分析一下?还有,ROX的量是否合适?下图1是纯合子,图2是杂合子。


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langlang[使用道具]
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怎么没人回答啊,还有,等位基因的散点图能判别出基因型,但看对应的扩增曲线却全都有2条带,这不是杂合子吗?困惑中
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yyaxw84[使用道具]
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有没有可能你测的SNP位点旁边有其他的多态位点,而探针序列正好设计在这个多态点上呢?
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langlang[使用道具]
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是的,有的,但是ABI公司设计和合成的,说是成功了的
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yyaxw84[使用道具]
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哦,不好意思,我以为是探针法测得是纯合子结果呢。
总感觉用酶切的方法测SNP不可靠。
实在不行,还是挑几个样本测序看看吧。
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langlang[使用道具]
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8
 
但是ABI的探针法的结果,从扩增曲线和散点图来看,结果也不一致啊,等位基因软件的散点图判别出基因型,但扩增曲线上2条线都扩出来了,这不表示都是杂合了吗?
我想把图贴上来,怎么不行呢
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tewank[使用道具]
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可以挑一些进行测序验证。
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langlang[使用道具]
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看来只有这条路了,说来也奇怪,虽然扩出来的都是有2条带,但散点图却能判别,请看图A23号标本


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