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标题:【求助】请教关于用大肠杆菌破碎液催化后反应液中...

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发表于 2016-2-16 15:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】请教关于用大肠杆菌破碎液催化后反应液中...

各位大神，本人最近在做用重组大肠杆菌发酵产酶破碎液催化的中试，现在每次催化完反应液，过滤非常慢，尝试过三足式离心机，压滤，加氯化钙絮凝抽滤，加硅藻土抽滤，都非常缓慢，请问各位大神在做大肠杆菌细胞破碎液催化时，此类问题是怎么解决的啊，目前只做到500L的反应，都非常难，估计做更大规模的就更难了，望赐教
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qhyu[使用道具]
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发表于 2016-2-16 15:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
萃取用的有机溶剂可以重复使用，不用增加多少成本的
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qhyu[使用道具]
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发表于 2016-2-16 15:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
陶瓷膜，另外产物若是小分子，就加一些蛋白变性剂，或者煮一下让蛋白变性絮凝，在过滤或离心，看你的产物是啥。

或者反应完了先萃取，再在萃取液里面处理，比如旋蒸啊之类的。以前做双歧杆菌转化甾醇的那个项目，就是转化完，然后萃取出来，然后旋蒸完事，纯度95%是有的。祝顺利
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yonger[使用道具]
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发表于 2016-2-16 15:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用微滤和超滤系统，有相关的设备可以购买。500L一个小时都不要就搞定了，而且蛋白的去除量应该能做到99%以上，残余蛋白少于1%
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发表于 2016-2-16 15:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 qhyu 于 2016-2-16 15:13 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
陶瓷膜，另外产物若是小分子，就加一些蛋白变性剂，或者煮一下让蛋白变性絮凝，在过滤或离心，看你的产物是啥。

或者反应完了先萃取，再在萃取液里面处理，比如旋蒸啊之类的。以前做双歧杆菌转化甾醇的那个项目，就是转化完，然后萃取 ...

产物是小分子，两三百的分子量，尝试过加氯化钙絮凝，但是效果不佳，变性剂有哪些呢？还有，做萃取啊，我后面以前是在过滤过后加足量食言，加等量醇类萃取的，后面旋蒸的，再结晶，如果按照你说的先做萃取会不会出现严重乳化啊？谢谢
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发表于 2016-2-16 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 yonger 于 2016-2-16 15:13 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
用微滤和超滤系统，有相关的设备可以购买。500L一个小时都不要就搞定了，而且蛋白的去除量应该能做到99%以上，残余蛋白少于1%

我的反应液中有20-40%的异丙醇，能不能用超滤处理啊？好像目前用的超滤都是有机膜吧
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发表于 2016-2-16 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 #甜# 于 2016-2-16 15:15 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我的反应液中有20-40%的异丙醇，能不能用超滤处理啊？好像目前用的超滤都是有机膜吧

是不是可以先用旋蒸把异丙醇去除，然后再用膜系统呢
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发表于 2016-2-16 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用高速管式离心机分离。
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发表于 2016-2-16 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 yonger 于 2016-2-16 15:15 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

是不是可以先用旋蒸把异丙醇去除，然后再用膜系统呢

这个能蒸完么？
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发表于 2016-2-16 15:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 #甜# 于 2016-2-16 15:13 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

产物是小分子，两三百的分子量，尝试过加氯化钙絮凝，但是效果不佳，变性剂有哪些呢？还有，做萃取啊，我后面以前是在过滤过后加足量食言，加等量醇类萃取的，后面旋蒸的，再结晶，如果按照你说的先做萃取会不会出现严重乳化啊？谢谢 ...

你的考虑是有道理的，先萃取可能杂质会停留在中间层，越来越多。建议：
1 加热至50-60度，维持20min（不破坏目标组分的话），然后陶瓷膜过滤。
2 异丙醇是否回收利用，产物与底物的极性差别大？若是，减压蒸馏除异丙醇，余液比重增加，便于进一步萃取。盐会腐蚀设备。
3 固定化酶或把酶固是在胞内再去催化是否更好。
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