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标题:[求助]实时定量RT-PCR都需要那些试剂和耗材？

研究僧112[使用道具]
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发表于 2011-10-16 15:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]实时定量RT-PCR都需要那些试剂和耗材？

[求助]实时定量RT-PCR都需要那些试剂和耗材？


我是研一研究生，需要用实时定量RT-PCR检测其中分子，请问都要用那些东西，用什么牌子的，价格是多少（注：实验室已有实时定量RT-PCR仪）
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蛐蛐儿[使用道具]
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发表于 2011-10-16 16:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这个从网上查查就可以了，根据方法不一样，可选用染料法或探针法。
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胖小妮子[使用道具]
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发表于 2011-10-16 16:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也是才开始做RT-qPCR

大致需要的试剂：

RNA分离及抽提试剂（trizol, 氯仿，异丙醇，无水酒精，DEPC水）

RT试剂盒

QPCR试剂盒（可根据情况选择厂家产品，因为自己做得少，没有比较不好推荐，可以请教高手推荐一下）

耗材

EP管（1.5ml，0.2ml）

枪头（1000ul, 200ul, 10ul)(为省事可以买无RNA酶优质枪头，当然为节约也可以用DEPC泡，本人比较懒没泡过）

八连管
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胖小妮子[使用道具]
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发表于 2011-10-16 16:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
补充一下刚才落下的

试剂：引物

琼脂糖，6×loading buffer，dna marker（鉴定RNA产物及PCR用）

仪器：分光光度仪，凝胶成像系统

(ps:你们实验室有人做去观摩几次就知道了，比在这里寻求帮助要好的多）

over
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冰激凌小姐[使用道具]
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发表于 2011-10-16 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
反转录试剂盒及PCR试剂盒推荐Takara公司的产品。
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小蜜蜂[使用道具]
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发表于 2011-10-16 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
各位老师，RT-PCR和RT-QPCR的区别是什么？我知道RT-PCR是实时定量PCR，不知道RT-QPCR是什么呢？
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发表于 2011-10-16 16:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
各位老师，RT-PCR和RT-QPCR的区别是什么？我知道RT-PCR是实时定量PCR，不知道RT-QPCR是什么呢？

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一般的话，RT-PCR指的是逆转录PCR，而RT-QPCR指的是实时荧光定量PCR。前者是半定量，后者是定量。
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one[使用道具]
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发表于 2011-10-16 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
其实荧光定量PCR也可以做半定量，比如染料法，也可以做绝对定量 比如：标准曲线法。

realtime pcr试剂盒推荐罗氏 ABI 还有 英俊的，都还可以，价格不便宜。

还有，如果你做的多的话，建议直接买专用的96孔板做，少的话可以考虑8连管
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发表于 2011-10-16 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
上面的战友说的比较全面了，就补充一下8连管的价格。

当时做的QPCR仪器是ABI 7500型的，需要配套的ABI 的8连管以及盖子（是分别出售的），价格不菲。

一盒8连管及其盖子，打完折还需要2400元。

切记不要在8连管盖子上做标记，曾经犯过这样的低级错误，因为光路需要从盖子经过。

最后往8连管中加样品时，需要戴手套。
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+田田+[使用道具]
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发表于 2011-10-16 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问RT一PCR和realtimeRT pcR的引物序列可以共用吗？谢谢！
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