生物质谱

在毕赤酵母中新表达一个重组蛋白，已确定其发生了糖基化现象，现想对其进行糖基化位点的鉴定，主要想通过胶内酶解——肽段富集——质谱分析——数据库检索等系列流程，问一下小木虫的各位大侠，有没有做过相关的工作，在国内一般哪个公司或研究机构做的比较好收费便宜？
谢谢各位！:tiger06:

质谱鉴定可以比较容易地检测糖基化。你可以找北京大学中心实验楼质谱室，在北京大学医学部2楼，那里设备是MADI-MS,精度还可以收费可能是北京地区最低的，及对北京大学内部服务也对北京大学之外服务。北京大学生物医药检测中心质谱室的收费比北京生命科学研究所旳质谱收费至少40%，如果你能找到北京大学医学部的实验室请他们出北京医学部内部收费条去北京大学中心实验楼质谱室做质谱，你给该实验室现金，那么价格还可再便宜一半。北京大学中心实验楼质谱室联系电话：010-82802676.

更正：“那里设备是MALDI-MS”，我是提笔忘字，;)。

具体请参见：Methods in Molecular biologu Vol-446 Post- Translational Modifications of Proteins, 2009,2nd Editon,不知为什么，不让我上传此书。
或者参考：Current protocols in protein sciences，wily，2002，该书免费下载（分为各章）：
cuturl('http://iask.sina.com.cn/u/1409639557/ish?folderid=515844&page=0')

感谢回复！可是要分析糖基化位点，貌似是要做肽段谱图，需十分精确，我查询到的公司一般用的都是nano-LC-MS/MS，为纳升级别的，且还需去糖基化酶进行去糖基化。请问你知道具体情况，能做这个吗？

MALDI-MS可以完成多肽的糖基化、磷酸化、甲基化、乙酰化等各种共价的修饰。具体样品准备你可以和有关实验室和检测中心协商。肽段谱图一般用胰蛋白酶有限水解蛋白质即可，因为肽分子量过大质谱无法精确检测出分子量，到用软件找匹配时结果不唯一。不过糖基的分支点肯定无法直接由MALDI-MS可以测出，必须在样品准备时使用不同的糖基酶有限水解后用MALDI-MS测定后拼装。

“要分析糖基化位点，貌似是要做肽段谱图，需十分精确。"不是貌似肽段谱图，而是貌似Ladder Sequencing，即Ediman降解结合质谱测定多肽序列，也就是用质谱代替凝胶电泳测定每一步Ediman降解之后减少一个氨基酸残基分子量的多肽段的相对分子量，但是现在能够用串联质谱直接测定多肽段的氨基酸序列了，不用在结合用Ediman降解。而且许多的多肽的糖基化、磷酸化、甲基化、乙酰化等各种共价的修饰，尤其是磷酸化修饰已经能够直接从质谱读出。但是不幸的是糖分子不是线性分子，而是可能有很多分支。至少在分支位点必须用糖苷酶水解以确定分支的类型，目前的质谱还打不到能够区别糖链不同分支的水平。

MMB 446 Post-Translational Modifications of Proteins, 2009,2nd Ed,
楼主参考一下了，有具体问题我们还可以自讨论.

今天就到这里，御姐我今天下午还要去拜访几位重要的客人；楼主愿意与我继续讨论，可以贴出来，不愿意就算了。GOOD LUCK！

十分不好意思，刚一直做实验，没有及时回复。谢谢你提供的参考信息，我会认真阅读，我之前一直在做克隆，对蛋白修饰质谱分析方面完全是小白，不懂的地方还请多多指教，谢谢！:work: