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标题:【求助】请教RNA电泳图

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发表于 2016-2-29 11:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】请教RNA电泳图


1％普通琼脂糖凝胶，120V,25min电泳，10ul样本RNA＋1ulLoadingBuff，急啊，谢谢


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2016-2-29 11:14
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发表于 2016-2-29 11:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
RNA的质量不怎么样，
你可以测定O260/O280看看有多少撒？
1.3以上你还式可以做RT的了。
但愿好运！
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发表于 2016-2-29 11:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
降解的听厉害的，我怎么看到４个带啊，是我的错觉吗
也不排除跑胶的问题
如非必要和技术成熟，提出rna后，可直接RT,出现问题在回头找


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发表于 2016-2-29 11:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
二位，谢谢啊，标本比较古老，又很珍贵啊，没办法，我跑的胶，最亮的怎么在前面啊，不是28s最亮，跑的最慢吗，谢谢指教
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发表于 2016-2-29 11:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

跑普通琼脂糖胶的结果不准确，并且25min时间也较长，建议你做非变性胶看看。
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发表于 2016-2-29 11:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
上样上到3－5UL试一下，电泳时间10左右，试试，有时候RNA提的不错，只不过是跑的问题
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发表于 2016-2-29 11:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

RNA有没有变性处理啊
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发表于 2016-2-29 11:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我遇到的问题和你很相似，应该是RNA有降解，但是具体我也不是很清楚。。。。：（
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发表于 2016-2-29 11:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的电泳条件:0.8%胶,105V,20cm胶版,18分钟,立即观察,不用变性胶.
1,3道做RT时用好一些的反转录酶EXscript等,延长反应时间,一般可以得到结果.
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发表于 2016-2-29 11:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的RNA质量很不好。我的意见是：
1.用普通电泳就好，但是建议电压升到130V，跑大约10分钟，条代分开即可。
2.胶还用1%的，但是配的TBE溶液，包括溶胶的还有做缓冲液的都用DEPC水处理。
3.电泳槽用NaOH溶液处理10分钟，在跑电泳之前。
4.不知道 你用什么试剂提取的RNA，但是你提到说你的材料很古老，说明你储存的时间比较长，如果是在液氮里面保存的话，应该没有问题，如果在－80度的超低温冰箱液还可以用，但是前提之前在液氮里面速冻过了。如果材料保存没有问题，我要说的是你在把材料拿出来以后研磨的过程中和之前都不可以让材料融化。有一次我的材料融化了，提的RNA和你的是很象的。
5.提取过程中注意的问题你应该很清楚，包括手套口罩，还有你提取之前的用品的处理。如果到位的话就应该没有问题了。
6.你跑的最快那些弥散的带是降解掉的。
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