【求助】用sybr green好还是用TaqMan探针好?

最新回复

• caihong (2016-3-03 16:50:35)

  
  你搞反了, 用sybr green是不能同时测多种样品的，而且sybr green也不能解决二聚体的问题，TaqMan倒是可以。你要是有足够经费，当然用TaqMan好。同时测5种是胃口太大了点，不过有公司正在开发。

• ququer787 (2016-3-03 16:52:26)

  
  你应该先将两种PCR实验弄弄熟，在引物设计和探针设计方面积累一点经验之后再决定。

• cocacola (2016-3-03 16:52:41)

  
  这要根据片段的长度来定啊,如果片段比较短,(最好在80-200bp)就用sybr green,如果比较长用taqman probe,当然,片段短做realtime更准确

• wiwi (2016-3-03 16:53:31)

  
  如果要同管同时检测5种
  无论是用sybr green
  还是用taqman
  都有难度的
  现在临床上用双检都有一定的难度。

• qqq111 (2016-3-03 16:53:44)

  
  其实同时检测几种细菌是可以的，国外可以同时检测18中细菌，如果你留意一下，在NCBI上应该可以搜索到那篇文章，采用的技术就是sybr green，利用Melting curve区分何种细菌，我觉得只有sybr green可以做到这一点，同时检测5种细菌，用Taqman 探针几乎是不可能的，难度太大，而且对仪器的要求也高，至少5通道才行。我当时想做，可惜老板不支持，做科研还是很有意思的。不过用荧光PCR检测细菌意义不大，主要还得摇菌。现有的方法也不差，不知你的目的毕业论文还是其他。

• mimili_901 (2016-3-03 16:54:00)

  
  十分感激各位的回答！我做的是毕业论文，其实我只要同时检测这5种细菌的数量变化，并不要求定性检测它们，因为这5种细菌已经知道存在了。所以还想问一下各位：用sybr green染料，还是用taqman呢？
  ytht88,谢谢你详细的回答。你说的那篇文章我没找到，你能帮我找一下吗？谢谢！

• 1472583690 (2016-3-03 16:54:37)

  
  一般用用sybr就可以了，若不需要同时一起检测的话就分开做还清爽些，但每次只能标记一种检测物质。多重标记在引物设计上难度较大，尤其是相互之间的干扰。目前世面上的定量PCR仪最多也只能同时检测四种（bio-rad和abi的高端机型可以装五种不同的滤光片但同时只能检测四种）。

• redbutterfly (2016-3-03 16:54:52)

  对多种细菌的检测,基本只有sybr green能 做到
  TaqMan花费太高,而且5种探针设计难度大

• one (2016-3-03 16:55:09)

  
  问题是sybr green的体系如何优化和实现还是比较麻烦的，特别是引物二聚体的干扰影响。如果你对realtimepcr还不是很熟悉的话，这样的结果非常难保证，可能的结果就是你花了大把时间和金钱最后得不到你要的结果，paper就无从谈起。

• youyou99 (2016-3-03 16:55:28)

  sybr green 和TaqMan 探针对于定量PCR的应用原理是不一样的。sybr green 是结合在双链的产物上的，而TaqMan 探针是特异性的针对目的片段设计的带有荧光标记的互补单链序列。就特异性和准确性而言，sybr green 方法不如TaqMan 探针，我在以往的实验中看到的结果也是这样的。不过TaqMan 探针的造价比较高，每条目的片段都要合成一条探针，如果同时测还需要五种荧光基团都能检测到的定量PCR仪，估计不可行。我不太明白你所说的检测五种细菌是什么意思，五种质粒吧，需要定量检测这么精确吗，而且定量PCR对这种检测目的真的有意义吗？如果是检测细菌的量，可否有其他的和细菌功能相关的办法？

• ending (2016-3-03 16:55:43)

  
  如果经费许可，我建议你用TaqMan探针

• one (2016-3-03 16:55:57)

  
  用sybr green 好,TaqMan探针价格高.只要你引物设计好,在一块板上分五孔同时检测可以达到你的要求,不过一定要有内标,否则不能定量.如果有引物二聚体干扰,可通过提高读板温度来消除,一般引物二聚体的Tm值<80度.

• yhtfyl (2023-2-24 07:36:39)

  感谢楼主分享，受教了