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标题:[求助]RNA抽提为何是很白的产物！

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发表于 2011-10-19 16:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]RNA抽提为何是很白的产物！

[求助]RNA抽提为何是很白的产物！


大家好!
我最近做RT-PCR ,使用的是C6细胞株,但是收集细胞TRIZOL裂解后,提取RNA ,所得产物是白色的物质,琼脂糖电泳后呈现红色的带状物,请问这是什么原因,怎么才可以提出RNA.在线等待!
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韩梅梅[使用道具]
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发表于 2011-10-19 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1　严格按RNA提取说明操作，注意消毒及DEPC处理器皿；
2　按TRIZOL说明书操作；
3　在操作过程中尽量在一个单独房间，少说话，勤换手套；
4　电泳时尽可能不用跑DNA的电泳槽，若实在没有多余的电泳设备时，要严格按参考书进行处理。
祝你好运！  
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发表于 2011-10-19 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
白色物质能溶解吗？有时RNA量大时会有明显的白色沉淀，加大溶解体积或是50－60度水浴能促进溶解。
电泳出现红色带状物？是几条带？标准的总RNA电泳应该是三条，发红是否因为EB的量加多了？  
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发表于 2011-10-19 16:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
白色的东西可能是RNA也可能是没有除尽的蛋白
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发表于 2011-10-19 16:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我怀疑是蛋白，再用氯仿萃取一下试一试
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泡泡[使用道具]
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发表于 2011-10-19 16:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可是不幸的事我到现在仍然没有提出RNA。再这我再次请教各位，75ML的培养瓶长满细胞，记数1X10*8，应该加多少TRIZOL？我提出的白色物质很容易溶解是不是蛋白污染？增加TRIZOL 的用量，是否可以解决呢？
在线等待！
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发表于 2011-10-19 16:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
大家好！别人很容易抽提出来的RNA为何我总是抽提不出来呢？真的很烦呢？我觉得我的操作步骤没错呀，严格按照操作规程的，唯一的问题就可能是我的细胞数太多了，所以我今天增加了TRIZOL的量，可是结果还是白色的沉淀，我真的是没办法了。该不会是TRIZOL的问题吧 ？我买的是INVITROGEN的TRIZOL，不过我开始的时候，没放在4度保存，而是室温，是不是TRIZOL的问题？
请各位大侠帮帮我！·
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发表于 2011-10-19 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
“结果还是白色的沉淀”
解决办法：
1.可在氯仿加后的4度12000g离心时间延长到20分钟（分离的更好）。
2.加异丙醇后，不要动它，让其静置10分钟（不然会有很多白色的沉淀）。
3INVITROGEN的TRIZOL，4度保存。其它也应4度保存。  
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发表于 2011-10-19 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那我请问一下我现在提时白色沉淀明显减少，而且很容易就溶解了，但就是没有那种透明的RNA。
还有我的操作规程上加异丙醇后不是要混匀在放置吗，我有点不明白，别见怪哦！  
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雪花子[使用道具]
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发表于 2011-10-19 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
"还有我的操作规程上加异丙醇后不是要混匀在放置吗"说明书是这样的。
我试过不太好，白色沉淀很多，跑胶也条带不清，具体原因我也不是很清楚，可能易使RNA降解。
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