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标题:【求助】求快速破碎大量大肠杆菌的方法

tuuu2[使用道具]
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发表于 2016-3-5 15:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】求快速破碎大量大肠杆菌的方法

现在在做大肠杆菌发酵实验，产物是胞内酶，但是现在缺少高效的、快速的大量细胞破碎方法，希望各路大神多多指教~~
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ququer787[使用道具]
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发表于 2016-3-5 15:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的蛋白的稳定性怎么样？大量的话可以用冻融破碎，但是可能会引起蛋白的降解和失活，且速度较慢。
我个人还是偏向于用超声裂解，虽说每次破碎量少，但是比较好控制，具体操作你可以看下这个：蛋白分离纯化之不同材料的预处理方法
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ujne[使用道具]
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发表于 2016-3-5 15:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
高压均浆机（配备制冷系统）就可以了。
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yychen[使用道具]
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发表于 2016-3-5 15:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
超声、溶菌酶、蛋白酶K都可以用
超声根据仪器功率先做预实验，保证样品EP管不发热就可以了，尽量冰水浴下超声
溶菌酶一般用量是5~10mg/ml差不多可以了，37度半小时，或者室温1.5小时，基本都化了。。。。
蛋白酶K用量是20-50ug/ml，55度水浴0.5-1.5小时，也都化了。。。反正能用，超声速度快一点，但是有可能会把蛋白部分变性，因为局部温度会很高，关键自己控制。另外2个酶处理就是时间有点长。。。没啥副作用。
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ququer787[使用道具]
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发表于 2016-3-5 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的蛋白的稳定性怎么样？大量的话可以用冻融破碎，但是可能会引起蛋白的降解和失活，且速度较慢。
我个人还是偏向于用超声裂解，虽说每次破碎量少，但是比较好控制，具体操作你可以看下这个：蛋白分离纯化之不同材 ...

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这个文献能在哪找得到？
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ququer787[使用道具]
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发表于 2016-3-5 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
高压均浆机（配备制冷系统）就可以了

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这个仪器一次性破碎量多大？效果怎么样？
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3648755[使用道具]
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发表于 2016-3-5 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这个文献能在哪找得到？...

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cuturl('http://www.detaibio.com/topics/protein-purification-cailiaoyuchuli.html')
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2016-3-5 15:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
工业打法-----均质机    也叫高压匀浆机。多少量都给你破了。
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