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标题:【求助】毕赤酵母发酵上清液——脱色素？

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发表于 2016-3-7 16:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】毕赤酵母发酵上清液——脱色素？

毕赤酵母上罐发酵生产细胞外产物，得到了广泛的应用。我用无机培养基上罐发酵，得到的是黄绿色的发酵上清液，经过了分离柱的分离纯化，色素还是存在。
色素成分有谁研究了解没？
请教下，色素怎么去除呢？？
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woshituzhu[使用道具]
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发表于 2016-3-7 16:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
活性炭吸附，离心去除活性炭
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woshi[使用道具]
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发表于 2016-3-7 16:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 woshituzhu 于 2016-3-7 16:46 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
活性炭吸附，离心去除活性炭

活性炭品牌不同，孔径也不同，吸附的物质大小也不同，但是很多厂家都不在外包装上标明的。

我曾经使用过几种活性炭来吸附我的粗酶液中的色素，但是效果都不算太好，酶活力会有损失。吸附时间久了，会把酶也吸附，我试过吸附10分钟和过夜的，结果过夜的酶损失稍大。

由于色素不重，所以加2%（W/V）处理，结果有一种活性炭可以去除一半色素，酶损失5%。由于活性炭也会占体积，所以如果用量太大，吸附的蛋白质会更多，所以别加太多。

由于活性炭不能经由离心完全去除，会造成OD600提高，所以从图中可以看出有的处理是OD600比原来酶液还高的。离心后用滤膜过滤，能把活性炭颗粒除去，OD600就会进一步下降。

我的对照为“原酶液不添加活性炭”，使用的活性炭分别为“粒状（天津市北长方正试剂厂，500g）”、“汕头市达濠精细化学品，500g”、“广东省台山市化工厂，500g，批号20080501”、“糖用活性炭”，如果你能买得到多个品种的活性炭，不妨也做一下我的这个实验。


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biabiade[使用道具]
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 小中大
活性炭吸附，离心去除活性炭
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发表于 2016-3-7 16:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
活性碳也吸蛋白的吧！！建议你用超滤的方法吧，可以同时置换缓冲液和浓缩
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 小中大


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原帖由 nut6694 于 2016-3-7 16:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
活性碳也吸蛋白的吧！！建议你用超滤的方法吧，可以同时置换缓冲液和浓缩

活性炭确实也吸附蛋白质的，但很多方法都会造成蛋白质的损失，另外，楼主说的是“细胞外产物”，不知道是蛋白质还是什么东西，要是分子量比较小，你的超滤就不起作用了。
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发表于 2016-3-7 16:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 biabiade 于 2016-3-7 16:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
活性炭吸附，离心去除活性炭

你说的很有道理，不过我觉的楼主是在做蛋白表达，你再问问楼主是在做什么吧？
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发表于 2016-3-7 16:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
十分感谢，我的胞外表达是蛋白，超滤我试过，效果不好。主要是效率不高，耗时长，蛋白容易降解。。
然，听说先盐析结晶，看到说结晶的产物也是黑色的，估计效果也未必很好
话说，过柱除去，但困于对色素物质的全然不知，无从设计
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 小中大


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原帖由 join 于 2016-3-7 16:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

你说的很有道理，不过我觉的楼主是在做蛋白表达，你再问问楼主是在做什么吧？

十分感谢，我的胞外表达是蛋白，超滤我试过，效果不好。主要是效率不高，耗时长，蛋白容易降解。。
然，听说先盐析结晶，看到说结晶的产物也是黑色的，估计效果也未必很好
话说，过柱除去，但困于对色素物质的全然不知，无从设计
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 小中大


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原帖由 join 于 2016-3-7 16:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

活性炭确实也吸附蛋白质的，但很多方法都会造成蛋白质的损失，另外，楼主说的是“细胞外产物”，不知道是蛋白质还是什么东西，要是分子量比较小，你的超滤就不起作用了。
...

十分感谢，我的胞外表达是蛋白，超滤我试过，效果不好。主要是效率不高，耗时长，蛋白容易降解。。
然，听说先盐析结晶，看到说结晶的产物也是黑色的，估计效果也未必很好
话说，过柱除去，但困于对色素物质的全然不知，无从设计
求，之前探索过的先哲们，有什么赐教的
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