小中大土壤脱氢酶活性测定采用TTC（2,3,5-triphenyltetrazolium chloride）还原法。新鲜土壤混匀后称取1 g土壤于带塞比色管中，加2.5 ml 1.0% TTC-Tris缓冲液（pH 7.6），充分振荡。同时设置对照，对照只加TTC-Tris缓冲液（pH 7.6），37℃下暗处恒温培养24 h。培养结束后立即加甲醇终止反应，并定容到25 ml，涡旋振荡1 min后静置，过滤，在485 nm处比色，酶活性以TTC的还原产物三苯基甲臢（TPF，triphenylformazan）生成量表示.
以上是我以前做的步骤，做水稻土很顺利。我觉的你的步骤里用了5g土加了5ml 溶液，这个比例不太行。还有就是培养后涡旋一下就行，没必要提那么长时间。仅是个人感觉，供参考
