【求助】关于细菌细胞荧光染色的问题

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标题:【求助】关于细菌细胞荧光染色的问题

youyou99[使用道具]
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发表于 2016-3-8 09:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

本人想用荧光显微镜或者激光共聚焦显微镜对细菌染色之后经行观察，看文献上很多都用的是InvitrogenLIVE/DEAD®BacLight试剂盒（货号L13152 ），里面好像是含有两种染色剂，一种是Syto9，可对所有细胞经行染色，另外一种是PI，对死细胞经行染色。现在想问一下大家必须要买这种试剂盒吗，一般对细菌经行荧光染色用什么试剂啊，染色效果怎么样呢？不买试剂盒的话是不是可以单独买染料？谢谢大家！

3648755[使用道具]
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发表于 2016-3-8 09:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这个试剂盒我五六年前用过，很好用，最好是买这种试剂盒，其实也不贵，当时是5000元左右一个试剂盒吧，能用很长时间的。

其他的荧光染料我用过，很麻烦，效果不好

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发表于 2016-3-8 09:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 3648755 于 2016-3-8 09:57 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
这个试剂盒我五六年前用过，很好用，最好是买这种试剂盒，其实也不贵，当时是5000元左右一个试剂盒吧，能用很长时间的。

其他的荧光染料我用过，很麻烦，效果不好 ...

你好，我还想问一下我想观察细菌生物膜，我看对于细菌胞外多糖一般用FITC-conA或者TRITC-conA经行染色，请问这个试剂你用过吗，这个染色具体应该怎么操作呢？谢谢！

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发表于 2016-3-8 09:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

FITC-conA效果很不错的，不过好像只是多糖的，因为生物膜中多糖含量很高，所以染完了就一大片一大片的，当时我们用的的是罗丹明做背景染色，但罗丹明的荧光相比之下很弱

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发表于 2016-3-8 09:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 45778 于 2016-3-8 09:58 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
FITC-conA效果很不错的，不过好像只是多糖的，因为生物膜中多糖含量很高，所以染完了就一大片一大片的，当时我们用的的是罗丹明做背景染色，但罗丹明的荧光相比之下很弱 ...

那你的意思就是说TRITC-conA染色的效果不是很好是吗？

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发表于 2016-3-8 09:59 资料个人空间短消息加为好友

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原帖由 youyou99 于 2016-3-8 09:58 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

那你的意思就是说TRITC-conA染色的效果不是很好是吗？

TRITC-conA和FITC-conA染色机理基本一样，只是个人感觉FITC-conA的荧光较明亮，TRITC-conA的荧光较弱。当然，要是双标的话还得看你另外一种染料怎么选择

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发表于 2016-3-8 09:59 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这个很抱歉了，最近几年没做类似的试验了，FITC-conA都没听说过。

youyou99[使用道具]
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发表于 2016-3-8 10:00 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 45778 于 2016-3-8 09:59 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

TRITC-conA和FITC-conA染色机理基本一样，只是个人感觉FITC-conA的荧光较明亮，TRITC-conA的荧光较弱。当然，要是双标的话还得看你另外一种染料怎么选择

您好，因为我以前没有做过荧光染色，所以想问一下具体的步骤，虽然看了一些文献，但都说的不是很详细。我的检测的生物膜是在盖玻片上培养起来的，到时候需要染色后观察，我是不是直接加入一定浓度和体积的染料避光染色一段时间，就可以在共聚焦显微镜上观察了还是需要其他的步骤？万事开头难，开始这些都很头疼啊。

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发表于 2016-3-8 10:00 资料个人空间短消息加为好友

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原帖由 youyou99 于 2016-3-8 10:00 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

您好，因为我以前没有做过荧光染色，所以想问一下具体的步骤，虽然看了一些文献，但都说的不是很详细。我的检测的生物膜是在盖玻片上培养起来的，到时候需要染色后观察，我是不是直接加入一定浓度和体积的染料避光染色一段时间， ...

TRITC-conA或FITC-conA直接加就可以，避光孵育后需要用培养基或PBS把染料洗掉

youyou99[使用道具]
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发表于 2016-3-8 10:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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原帖由 45778 于 2016-3-8 10:00 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

TRITC-conA或FITC-conA直接加就可以，避光孵育后需要用培养基或PBS把染料洗掉

您好，我还有个问题，用共聚焦显微镜观察生物膜的时候一般要不要用5%的戊二醛固定啊，有些文献上说要有些也没写。是不是一般就是先用缓冲液将游离的细胞洗掉，加荧光染料避光育温染色，之后洗掉多余的染料就可以在显微镜下观察了？

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