小中大【求助】跪求解答食用菌原生质体制备和融合的问题
本科和硕士都不是做真菌育种的，对这方面不是很清楚。
头回接触原生质体制备和杂交融合的问题，老师的意思是想挑平菇和秀珍菇进行杂交，
就想问一下：
1、能否传一份详细的类似真菌的原生质体制备的步骤
2、看了一些这方面的帖子，发现很多讨论说：不同真菌的制备方法不同，很多酶的量、温度要不断试验，问题是我连个参考也没有o(╯□╰)o
3、之前一位老师带着我做，我们都不大会，结果-----惨不忍睹，做了半天镜检连原生质体长什么样都不知道，于是俺有看了点资料，发现
有人说原生质体镜检要用暗显微镜还是神马的，普通光学显微镜不行，摔~~~~
如果给我步骤太麻烦，我把之前做的原生质体制备方法贴出来，大家帮我找找毛病也行，谢谢大家：
1、挑取4小块菌落放入液体培养基培养1周，取于液体培养基中的菌丝备用（一周都是静置培养，长在液体表面漂浮的菌落不用，原因不明o(╯□╰)o）
2、菌悬液倒入离心管
3、2500rpm离心15min
4、弃上清，沉淀中倒入0.6mol/l的甘露醇30ml，离心15min
5、弃上清，倒入甘露醇4ml，离心
6、弃上清，倒入溶壁酶(30ml水+0.15g蜗牛酶)
7、37°，3.5h(由于没有这种条件，所以选择水浴，不知道有没有影响o(╯□╰)o)
8、菌丝用装有脱脂棉的注射器过滤
9.过滤后得到原生质体，镜检
10、之后的融合还没做。。。。现有的仪器是CY-3型细胞融合仪
