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标题:[求助]请教－PCR基础问题

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发表于 2011-10-20 14:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]请教－PCR基础问题

[求助]请教－PCR基础问题


在进行PCR时，使用的反应体系使用的是师兄们摸索好的反应体系。但根据分子克隆上面的标准反应条件：如：DNTP 200μmol/L 等，这些成分如何换算成我们实际应用时的体积的？请高手具体解答，谢谢！
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panda王[使用道具]
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发表于 2011-10-20 15:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
dNTP为200μmol/L是指它的终浓度,例如如果你的工作液被稀释到10mmol/L,在
15μl的PCR体系中加0.3μl就可以了.
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发表于 2011-10-20 15:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还有其他成分呢？如模板 镁离子等
谢谢！
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发表于 2011-10-20 15:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还有其他成分呢？如模板 镁离子等
谢谢！
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飞天小鹿[使用道具]
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发表于 2011-10-20 15:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
模板的浓度一般可以根据你的电泳结果（和Marker比！）或测OD值的结果估计出来质量，再换算成体积。
镁离子的浓度，可以根据试剂的产品介绍中获得相关的浓度，然后，可以小量做个剃度试验，就能找到一个最佳的浓度了！  
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发表于 2011-10-20 15:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼上高手能否给出具体公式（结合举例），谢谢
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发表于 2011-10-20 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1.PCR反应体系中的总体积不变的前提下(例如50ul体系)，体系中加入某一成分的量与你需要的最终浓度和贮存液浓度决定，贮存液浓度*X/50=最终浓度，算出的X就是你要加入某一成分的用量，
2.模板用量与你制备模板中目的DNA的浓度有关，目的DNA浓度高，用的量就少，目的DNA浓度低，用的量就少
3.实验条件一般根据试剂盒中的说明书是可以的，温度要根据引物的Tm值来定，这在第一实验时都是要摸索条件的  
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发表于 2011-10-20 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1.PCR反应体系中的总体积不变的前提下(例如50ul体系)，体系中加入某一成分的量与你需要的最终浓度和贮存液浓度决定，贮存液浓度*X/50=最终浓度，算出的X就是你要加入某一成分的用量，
2.模板用量与你制备模板中目的DNA的浓度有关，目的DNA浓度高，用的量就少，目的DNA浓度低，用的量就少
3.实验条件一般根据试剂盒中的说明书是可以的，温度要根据引物的Tm值来定，这在第一实验时都是要摸索条件的  
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 小中大
最后问各位高手有关引物的体积
在公司合成引物提供的清单上，只有引物的μg/OD，这个如何转换成体积呢？
谢谢！
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发表于 2011-10-20 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最后问各位高手有关引物的体积
在公司合成引物提供的清单上，只有引物的μg/OD，这个如何转换成体积呢？
谢谢！
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