小中大我最近也遇到这个问题，除了怀疑病毒本身的问题之外，我的RNA也提不好，因为看家基因都扩得较暗。
以前我培养细胞提取RNA，一瓶细胞的数量在5×10（6）左右，沉淀后，能在管底看到较明显或者淡淡的白色沉淀，反转录后PCR扩增目的基因还可以。但是，这几次提取细胞毒RNA，因为不是我培养的，不知道细胞数量，（但是肯定也是常规的数量，不会差很多），沉淀离心之后，什么都看不到，反转录PCR扩增病毒，只能出来淡淡的一条带。我认为细胞毒PCR结果应该是很亮的一条带，所以，我觉得可能RNA含量太低的缘故。增加模板量并不解决问题，因为模板量过高，可能由于模板中的杂质反而会抑制taq酶的活性。
反复冻融能提高RNA提取效果是吗？那我先试试，希望会有效果。
其他大侠还有什么高招吗？还有，你们提取RNA是细胞毒液中细胞含量为多少？谢啦！
