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标题:[求助]如何分离134bp和156bp俩个片段?

987789[使用道具]
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[求助]如何分离134bp和156bp俩个片段?

[求助]如何分离134bp和156bp俩个片段?


我从白细胞中提取DNA,进行PCR扩增后须电泳分离134bp和156bp俩个片段,我的胶大约12厘米长,请各位指教我须用哪种胶?浓度,电压,时间多少合适?谢谢。
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可选择使用6%的PAGE胶!跑垂直平板电泳!  
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QUOTE:
AerobiologiaTao wrote:
可选择使用6%的PAGE胶!跑垂直平板电泳!

我已用8%的PAGE胶,200伏电压跑过,但效果不好。不知什么原因?有人建议我用俩种浓度的胶跑,但我没查到有关资料,不知如何做?
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差22个bp,我跑过的啊,3%的那个 LE argrose。就是当心不要弄太多泡,这个浓度下,泡太多,小心。
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quote]jjyy wrote:
差22个bp,我跑过的啊,3%的那个 LE argrose。就是当心不要弄太多泡,这个浓度下,泡太多,小心。
[/quote]我用这种方法跑过,但效果不好,染色后加样孔特亮,而所需条带基本看不到。不知为什么?
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我跑的那个是497和470bp的,基本是分不开,不过我觉得你的这个片段很小用3.0%的胶跑应该是没有问题的,如果是所需条带基本看不到-----------我想很可能是你跑的时间太长了,EB可能都从胶里面跑出去,你可以把时间缩短看看。。
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我跑的那个是497和470bp的,基本是分不开,不过我觉得你的这个片段很小用3.0%的胶跑应该是没有问题的,如果是所需条带基本看不到-----------我想很可能是你跑的时间太长了,EB可能都从胶里面跑出去,你可以把时间缩短看看。。
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我已用8%的PAGE胶,200伏电压跑过,但效果不好。不知什么原因?有人建议我用俩种浓度的胶跑,但我没查到有关资料,不知如何做?

用8%的非变性PAGE跑是完全没问题的,我用这种方法分开过270bp和280bp的片段。具体的步骤你可以查查《分子克隆》。
个人总结的一些需要注意的事项:
1. 关键是水,要不然背景会很差,一般用双蒸水就没有问题。
2. 注意胶混合均匀及灌胶后玻板中间和底部不要有气泡
3. 缓冲液要经常换,最好用一次就换
4. 在用甲醛和碳酸钠进行显色前,最好加点硫代硫酸钠,可使染的胶好看些。
仅供参考。
另外,用200V的电压是不是太高了?会造成条带的弯曲,我一般用110V,跑8-10个小时就可以了。  
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987789[使用道具]
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我已用8%的PAGE胶,200伏电压跑过,但效果不好。不知什么原因?有人建议我用俩种浓度的胶跑,但我没查到有关资料,不知如何做?

用8%的非变性PAGE跑是完全没问题的,我用这种方法分开过270bp和280bp的片段。具体的步骤你可以查查《分子克隆》。
个人总结的一些需要注意的事项:
1. 关键是水,要不然背景会很差,一般用双蒸水就没有问题。
2. 注意胶混合均匀及灌胶后玻板中间和底部不要有气泡
3. 缓冲液要经常换,最好用一次就换
4. 在用甲醛和碳酸钠进行显色前,最好加点硫代硫酸钠,可使染的胶好看些。
仅供参考。
另外,用200V的电压是不是太高了?会造成条带的弯曲,我一般用110V,跑8-10个小时就可以了。  
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