小中大我已用8%的PAGE胶,200伏电压跑过,但效果不好。不知什么原因?有人建议我用俩种浓度的胶跑,但我没查到有关资料,不知如何做?
用8%的非变性PAGE跑是完全没问题的,我用这种方法分开过270bp和280bp的片段。具体的步骤你可以查查《分子克隆》。
个人总结的一些需要注意的事项:
1. 关键是水,要不然背景会很差,一般用双蒸水就没有问题。
2. 注意胶混合均匀及灌胶后玻板中间和底部不要有气泡
3. 缓冲液要经常换,最好用一次就换
4. 在用甲醛和碳酸钠进行显色前,最好加点硫代硫酸钠,可使染的胶好看些。
仅供参考。
另外,用200V的电压是不是太高了?会造成条带的弯曲,我一般用110V,跑8-10个小时就可以了。