【求助】测定分子量，跑电泳可以是SDS-PAGE吗

生物质谱 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】测定分子量，跑电泳可以是SDS-PAGE吗

需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】测定分子量，跑电泳可以是SDS-PAGE吗

蓝色雨梦[使用道具]
五级
Rank: 5

UID 128278
精华 0
积分 2012
帖子 1064
信誉分 100
可用分 6513
专家分 0
阅读权限 255
注册 2014-10-28
状态离线

发表于 2016-3-19 09:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

本人有一PEG修饰蛋白，修饰后分子量在90kD左右，想通过MALDI-TOF测定分子量。问题是蛋白纯度不高，想通过PAGE胶回收的方法获得高纯度的蛋白。搜索了论坛有关蛋白胶回收的帖子，收益匪浅，但仍有问题请教大家：
1. 关于电泳变性还是非变性：我的用途是测定分子量，跑电泳可以是SDS-PAGE吗？SDS会污染样品导致分子量测定结果吗？最保险的方法是native-PAGE？
2.关于电泳后的蛋白洗脱：论坛上给出了两种方法，一是将胶切碎或研碎，置于溶液中，冰箱过夜，离心得上清再透析浓缩；二是电洗脱，置于透析袋中水平电泳。第一种方法比较简单，但是我担心研碎的过程会不会导致胶成分小部分溶解，从而导致上清中成分复杂，影响质谱测定？在这点上说是不是电洗脱方法会好一点呢？
请虫友们帮忙分析分析，先行谢过啦！

huali[使用道具]
五级
Rank: 5

UID 129742
精华 0
积分 2841
帖子 1562
信誉分 100
可用分 9308
专家分 0
阅读权限 255
注册 2014-12-17
状态离线

发表于 2016-3-19 09:53 资料个人空间短消息加为好友

小中大

【回复】

类似，也是做电泳分离蛋白，磷酸蛋白非磷酸蛋白混合物，同求如上问题呵呵

xgy412[使用道具]
五级
Rank: 5

UID 131549
精华 0
积分 2279
帖子 1257
信誉分 100
可用分 7776
专家分 0
阅读权限 255
注册 2015-1-29
状态离线

发表于 2016-3-19 09:53 资料个人空间短消息加为好友

小中大

【回复】

类似，也是做电泳分离蛋白，磷酸蛋白非磷酸蛋白混合物，同求如上问题呵呵

PP熊[使用道具]
一星
Rank: 6

UID 128277
精华 1
积分 3330
帖子 1976
信誉分 102
可用分 11412
专家分 10
阅读权限 255
注册 2014-10-28
状态离线

发表于 2016-3-19 09:53 资料个人空间短消息加为好友

小中大

【回复】

其实蛋白做MALDI-TOF，SDS-PAGE电泳可以的，不必纯化，直接给胶就可以了，保证3ug量就够了

QQ爱[使用道具]
一星
Rank: 6

UID 128332
精华 0
积分 3321
帖子 1901
信誉分 100
可用分 11214
专家分 0
阅读权限 255
注册 2014-10-30
状态离线

发表于 2016-3-19 09:54 资料个人空间短消息加为好友

小中大

【回复】

请问楼上的，你的MALDI-TOF是在哪里做的？90kd的蛋白是不是不容易做啊？

rrra6[使用道具]
一星
Rank: 6

UID 129717
精华 0
积分 3070
帖子 1780
信誉分 100
可用分 10395
专家分 0
阅读权限 255
注册 2014-12-17
状态离线

发表于 2016-3-19 09:54 资料个人空间短消息加为好友

小中大

【回复】

你好，本人最近在用20KD PEG修饰24KD左右的蛋白，但在跑15% SDS-PAGE电泳后，染色发现经修饰的蛋白拖尾现象很严重，请问你遇到过这种现象吗？该如何解决呢？谢谢！

兔子[使用道具]
一星
Rank: 6

UID 128223
精华 0
积分 3423
帖子 2045
信誉分 100
可用分 12135
专家分 0
阅读权限 255
注册 2014-10-27
来自内蒙古乌兰察布集宁
状态离线

发表于 2016-3-19 09:55 资料个人空间短消息加为好友

小中大

【回复】

SDS-page的分子量可能和理论分子量有些差异，我的蛋白的size就偏大，打质谱的时候直接从胶上切下目的条带送去就行