【求助】MALDI-TOF-MS检测蛋白质的话准确度

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标题:【求助】MALDI-TOF-MS检测蛋白质的话准确度

danzi[使用道具]
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发表于 2016-3-19 10:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

MALDI-TOF-MS检测蛋白质的话准确度可达到多少？我做的样品对照之间相差200多个质量数，这个应该不是误差吧？

hcy517[使用道具]
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发表于 2016-3-19 10:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

【回复】

能问一下，你做测试，溶液怎么配的，基质选的什么吗？

钻石[使用道具]
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发表于 2016-3-19 10:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

【回复】

好像不同的样品基质不同吧，具体我也不太清楚。

小熊妮妮[使用道具]
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发表于 2016-3-19 10:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

【回复】

看样品的纯度和分子量。样品越纯，含盐量越低，可区分200多的蛋白的分子量越高。
不特殊处理的蛋白，使用普通的MALDI，可区分200多质量数的分子量在一千到两万之间。

xiaoxiaoai[使用道具]
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发表于 2016-3-19 10:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

【回复】

我纯化出来的蛋白质做两次BC A 蛋白定量，一次稀释5倍，一次稀释10倍，结果分别是4.17mg/ml，1.4mg/ml，拟合系数均在0.99以上，为什么差距会这么大呢。这下面要检测蛋白活性，不知道按照哪个算，我用了cck-8法检测细胞活性，说明书上写着，要100ul 5000个细胞，我想了解下这个怎么估计呢，难道在铺96孔板之前要把细胞悬浮，计数，然后再铺板吗？还有蛋白质稀释好后能直接放在细胞房超净台里，还是放在冰上，要不要对蛋白进行灭菌处理等，谢谢

daomei[使用道具]
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发表于 2016-3-19 10:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

【回复】

我也遇到bca稀释后浓度不准的情况。不过我最终是按照冻干品重量浓度算的。
我是做mtt，需要对细胞进行悬浮计数，稀释到自己要的浓度。
要做到蛋白无菌，就是0.22μm过滤，加药时在超净台内操作。我因为量很少，过滤会有损失，有时会把冻干品拿到超净台，拿灭过菌的无菌水溶解，再加药，这样不能保证完全无菌，不过比在外面溶了直接用来加药要强。
你们实验室应该有人做过的，多问问呗。

yazi[使用道具]
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发表于 2016-3-19 10:06 资料个人空间短消息加为好友

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